細(xì)胞名稱  Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人胃癌細(xì)胞；MKN-45-Cas9-526運(yùn)輸
形態(tài)特性   圓形

生長(zhǎng)特性    貼壁生長(zhǎng)

特征特性   該細(xì)胞是采用慢病毒感染的方式使MKN45細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)Cas9-Flag-Neo，經(jīng)400ug/mlG418篩選得到的單克隆，經(jīng)Western Blotting驗(yàn)證該克隆可以表達(dá)Cas9蛋白，可直接用Crispr技術(shù)編輯基因組DNA。

培養(yǎng)條件   RPMI 1640 (w/o Hepes)  20%FBS；400ug/ml G418　

傳代方法   建議初始濃度2.0×105 cells/ml，1:3傳代；4~5天１次。

傳代情況    C3

凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS　

支原體檢測(cè)    培養(yǎng)法（-）　

STR   Amelogenin：x,x；CSF1PO：12,12；D12S391：26,26；D13S317：8,11；D16S539：10,10；D18S51：16,16；D19S433：14,16.2；D21S11：31,31；D2S1338：18,18；D3S1358：15,16；D5S818：10,11；D6S1043：14,14；D7S820：10,11；D8S1179：13,17；FGA：19,24；Penta E：10,10；TH01：7,7；TPOX：8,8；vWA：19,19；
同工酶   

染色體   

使用權(quán)限    A類
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人胃癌細(xì)胞；MKN-45-Cas9-526運(yùn)輸冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人胃癌細(xì)胞；MKN-45-Cas9-526運(yùn)輸操作步驟： 
1）貼壁細(xì)胞傳代：提前將培養(yǎng)基、PBS放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱，用75%酒精擦拭后再放入超凈臺(tái)內(nèi)，吸除或倒掉細(xì)胞瓶?jī)?nèi)舊培養(yǎng)液，加少量PBS潤(rùn)洗細(xì)胞，加入適量*，使*的量能蓋住細(xì)胞，37℃孵育，每隔2~3min顯微鏡下觀察，待貼壁細(xì)胞間間隙變大、細(xì)胞趨于圓形但還未漂起時(shí)棄去*，加入新鮮培養(yǎng)基，晃動(dòng)細(xì)胞瓶，終止*作用，用吸管小心吹打貼壁的細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液?？刂拼荡虻牧Χ?，避免產(chǎn)生大量的氣泡，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)，隔天觀察貼壁生長(zhǎng)情況。 
2）懸浮細(xì)胞傳代：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到無菌離心管內(nèi)，1000rpm離心5min，棄去上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，用吸管小心吹散沉淀，制成細(xì)胞懸液，將細(xì)胞懸液分別接種到另外的2~3個(gè)細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，加入新鮮培養(yǎng)基，置37℃溫箱培養(yǎng)。
購買Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人胃癌細(xì)胞；MKN-45-Cas9-526運(yùn)輸注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們。
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。
3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。
瘦素(LEP)重組蛋白    Recombinant Leptin (LEP)
瘦素受體(LEPR)重組蛋白    Recombinant Leptin Receptor (LEPR)
衰變加速因子(DAF)重組蛋白    Recombinant Decay Accelerating Factor (DAF)
雙調(diào)蛋白(AREG)重組蛋白    Recombinant Amphiregulin (AREG)
雙解絲蛋白1(TWF1)重組蛋白    Recombinant Twinfilin 1 (TWF1)
水通道蛋白1(AQP1)重組蛋白    Recombinant Aquaporin 1, Colton Blood Group (AQP1)
水通道蛋白2(AQP2)重組蛋白    Recombinant Aquaporin 2, Collecting Duct (AQP2)
水通道蛋白5(AQP5)重組蛋白    Recombinant Aquaporin 5 (AQP5)
水通道蛋白9(AQP9)重組蛋白    Recombinant Aquaporin 9 (AQP9)
*蛋白酶1(PRSS1)重組蛋白    Recombinant Protease, Serine 1 (PRSS1)
*蛋白酶23(PRSS23)重組蛋白    Recombinant Protease, Serine 23 (PRSS23)
絲蛋白結(jié)合LIM蛋白1(FBLIM1)重組蛋白    Recombinant Filamin Binding LIM Protein 1 (FBLIM1)
7-Epitaxol  7-表*  105454-04-4  853.906140000001  C47H51NO14刺桐Erythrina arborescens     Erythrabyssin II     阿比西尼亞桐素 I     77263-06-0     C25H28O4     ≥95%
Gypenoside XLIX  絞股藍(lán)皂苷XLIX  94987-08-3  1047.23  C52H86O21絞股藍(lán) Gynostemma pentaphyllum     Gynosaponin I     none     1207861-69-5     C42H72O12     ≥95%
Benzeneprop*,N-[(1S)-1-[(acetyloxy)methyl]-2-phenylethyl]-a-(benzoylamino)-, (aS)-  金色酰胺醇酯  56121-42-7  444.52222  C27H28N2O4大魚藤樹Derris robusta     Demethylvestitol     none     65332-45-8     C15H14O4     ≥97%
金錢松Pseudolarix kaempferi     Persicoside     桃苷     28978-03-2     C23H26O11     ≥95%鬧羊花毒素III  Grayanotoxane-5,6,10,14,16-pentol,2,3-epoxy-, (2b,3b,6b,14R)-  26342-66-5  368.46448  C20H32O6
102130-43-8  蒼術(shù)苷二鉀鹽；蒼術(shù)苷  19-Norkaur-16-en-18-oicacid, 15-hydroxy-2-[[2-O-(3-methyl-1-oxobutyl)-3,4-di-O-sulfo-b-D-glucopyranosyl]oxy]-,dipotassium salt, (2b,15a)- (9CI)    C30H44K2O16S22-Pentenoic acid,3-methyl-,(1S,3aR,5R,7S,7aS)-1-[(1R)-1-(acetyloxy)ethyl]octahydro-4-methylene-7-(1-methylethyl)-2-oxo-1H-inden-5-ylester, (2E)-  款冬酮  104012-37-5  390.51306  C23H34O5
*Andrographis paniculata     ent-Labda-8(17),13Z-diene- 15,16,19-triol 19-O-glucoside     等效-賴百當(dāng)-8(17),13Z-二烯-15,16,19-三醇 19-O-葡萄糖甙     1245636-01-4     C26H44O8     ≥95%思茅松Pinus kesiya var. langbianensis     12-Acetoxyabietic acid     12-乙酰氧基松香酸     83
山茱萸苷  cornin  548-37-8  388.36646  C17H24O1010597-60-1  羥基酪醇  3,4-Dihydroxyphenylethanol  154.16  C8H10O3
鞭打繡球Hemiphragma heterophyllum     Tricin     苜蓿素     520-32-1     C17H14O7     ≥98.5%板凳果Pachysandra axillaris     Axillaridine A     矮陀陀酰胺堿 A     128255-16-3     C30H42N2O2     ≥98%
景洪暗羅'Polyalthia cheliensis     6α,16,18-Trihydroxycleroda -3,13-dien-15,16-olide     6ALPHA,16,18-三羥基克羅-3,13-二烯-15,16-內(nèi)酯     1017233-48-5     C20H30O5     ≥95%五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.     Schizantherin B     五味子酯乙     58546-55-7     C28H34O9     ≥98%
Cas9穩(wěn)定表達(dá)的人胃癌細(xì)胞；MKN-45-Cas9-526運(yùn)輸2”-O-沒食子酰基金絲桃苷  2'-O-Galloylhyperin  53209-27-1  628.53432  C30H28O15萊菔子Semen Raphani     Sinapine Thiocyanate     芥子堿硫酸鹽     7431-77-8     C16H24NO5CNS     ≥98%
Gastrodin  *  62499-27-8  286.28  C13H18O7黃荊Vitex negundo     Penduletin     none     569-80-2     C18H16O7     ≥98%
白芷 A. dahurica (Fisch.) Benth. et Hook     Isoimperatorin     異歐前胡素     482-45-1     C16H14O4     ≥98%刺桐Erythrina arborescens     Soyasapogenol B     大豆甾醇B     595-15-3     C30H50O3     ≥97%
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