服務(wù)流程：
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
森林腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013413 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測稀釋液B：1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
小鼠血栓素B2(TXB2)砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:1mol/L硝酸）分裂周期蛋白16抗體
小鼠血栓素B4(TXB4)砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100mg/L,溶劑：微量硫酸）有絲分裂著絲粒蛋白F抗體
小鼠血栓前體蛋白(TpP)砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,體：1%HNO3）9號染色體開放閱讀框115抗體
小鼠絡(luò)絲蛋白(RELN)砷標(biāo)準(zhǔn)溶液（0.500μg/g,體:0.2%(v/v)H2SO4,K+2.2mg/L,Na+23mg/L,Cl-37mg/L）CTDSPL蛋白抗體
小鼠胸腺表達(dá)趨化因子(TECK)標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑：水）CTDSPL2蛋白抗體
小鼠狀腺球蛋白(TG)標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,體：水）酰膽堿酯酶相關(guān)蛋白抗體
小鼠狀腺激抗體(TSAb)鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:1.5 mol/L HNO3）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白83抗體
小鼠抗促狀腺素受體抗體(TRAb)鉍標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,溶劑:1.0 mol/L HNO3）二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白5抗體
小鼠促狀腺素(TSH)鈹標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000μg/ml,體:1.5 mol/L HNO3）磷酸化二氫嘧啶酶樣2抗體
小鼠白介素27(IL-27)銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（1000mg/l,溶劑：1%硫酸）腦衰蛋白反應(yīng)調(diào)節(jié)蛋白4抗體
小鼠促狀腺胚胎發(fā)育因子(TEF)銅標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/l,溶劑:1%硫酸）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白87抗體
小鼠促狀腺素釋放激素(TRH)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（三價(jià)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液1000μg/ml）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白92抗體
小鼠狀腺素抗體(TAb)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（500mg/L,溶劑：水）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD8抗體
小鼠狀腺結(jié)合球蛋白(TBG)鉻標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,體：水）大腦亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)域蛋白抗體
小鼠狀腺素(T4)鈣標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,體: 5%HCl）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白93抗體
小鼠緊密連接蛋白-1(TJP1)鎘標(biāo)準(zhǔn)溶液（100µg/mL,體: 1%HNO3）卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白96抗體
森林腦炎病毒探針法熒光定量RT-PCR試劑盒IL-26/AK155 白介素26抗體槲皮素,二水 97%
IL-28A/IFNL2 白介素28A抗體槲皮素 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98.5%
IL-28B/IL-28C 白介素28B抗體槲皮素 97%
IL-29/IFNL1 白介素29抗體槲皮素,二水 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥98% (HPLC)
IL-31 白介素31抗體L-鼠李糖，一水 99%
IL-31RA/CRL3 白介素31受體a抗體二氧化硫脲 98%
IL-32/NK4 白介素32抗體4,5-二氯鄰二 98%
IL-33/NFHEV 白介素33抗體酰肼 90%
反應(yīng)五要素：
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
