儲(chǔ)存條件:
僅用于科研14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | 茵陳LAMP鑒定試劑盒供應(yīng)商 |
英文名稱 | Herba artemisiae scopariae |
貨號(hào) | YSP9451 |
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,Z后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。
主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù):引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR?
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
BMPR- II (Human Bone morphogeneic proein recepor II ) ELISA Ki 人骨成型蛋白受體Ⅱ多聚 96%環(huán)己醇 Sandard for GC,>99.0% (GC)Babesia equi
BMP-7(Mouse Bone morphogeneic proein 7) ELISA Ki 小鼠骨成型蛋白71,4-環(huán)己烷二醇(順+反異構(gòu)體混合物) 99%環(huán)己醇 CP,97%Babesia gibsoni
BMP-7(Human Bone morphogeneic proein 7) ELISA Ki 人骨成型蛋白7N,N-二基酰胺 ≥99.8%環(huán)己醇 AR,98%Babesia major
BMP-7 ELISA Ki (Rabbi) 兔骨成型蛋白7N,N-二基醇胺 99.0%己內(nèi)酰胺 99%Babesia moasi
BMP-6(Mouse Bone morphogeneic proein 6) ELISA Ki 小鼠骨形成蛋白6二醇胺 超純級(jí),≥99.5%(GC)磺酸 AR,97.0% (劇品)Babesia ovis
BMP-6(Human Bone Morphogeneic Proein 6) ELISA Ki 人骨形成蛋白6二醇胺 Sandard for GC, ≥99.7% (GC)環(huán)己酮 AR,99.0%Babesia perroncioi
BMP-6 ELISA Ki 大鼠骨形成蛋白6二醇胺 CP,98%酸羥胺 AR,99.0%Babesia spp.
BMP-4(Mouse Bone morphogeneic proein 4) ELISA Ki 小鼠骨成型蛋白4二醇胺 AR,99%鹽酸 GR,36-38%Bacillus anhracis
BMP-4(Human Bone morphogeneic proein 4) ELISA Ki 人骨成型蛋白4二醇胺 ACS, ≥99.0% (GC)1,1,1-三烷 包含0.05%C4H8O2穩(wěn)定劑,sandard for GC,≥99.5%Bacillus arophaeus
BMP-4 ELISA Ki 大鼠骨成型蛋白4氧化二基錫 98%(劇品)1,1,1-三烷 AR,98%Bacillus cereus E33 E33
茵陳LAMP鑒定試劑盒供應(yīng)商Mouse Dab1(Disabled homolog 1) ELISA Ki培養(yǎng)基四號(hào)瓊脂
Mouse ABCA1(AP-binding cassee sub-family A member 1) ELISA Ki溶菌酶2000 萬(wàn) IU/gCBS瓊脂
Mouse Fabp3(Fay acid-binding proein, hear) ELISA Ki0.1%溶菌酶溶液緩沖-甘油化鈉溶液
Mouse Ly6c1(Lymphocye anigen 6C1) ELISA Ki酸鹽肉湯3%化鈉堿性蛋白胨水
Mouse Aopep(Aminopepidase O) ELISA Ki無(wú)菌酸鹽肉湯堿性蛋白胨水
Mouse Hibadh(3-hydroxyisobuyRae dehydrogenase, miochondrial) ELISA Ki酸鹽還原試劑SCDLP液體培養(yǎng)基
Mouse Gad1(Gluamae decarboxylase 1) ELISA Ki改良 V-P 培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)瓊脂(普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基)
Mouse ACO2(Aconiae hydRaase, miochondrial) ELISA KiV-P 試劑含鐵牛奶培養(yǎng)基
Mouse Ahcy(Adenosylhomocyseinase) ELISA Ki動(dòng)力培養(yǎng)基亞酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂基礎(chǔ)(SPS)
Mouse Ppy(Pancreaic prohormone) ELISA Ki胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基液體醇酸鹽培養(yǎng)基(F)
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí),會(huì)出現(xiàn)Smear。