特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
海藻糖6磷酸酯酶(TPP)測試盒微量法 | 微量法 | 100管/48樣 | BJ-01611230-1 |
商品介紹:
測定意義: 海藻糖又稱為漏蘆糖、蕈糖,是由兩個(gè)葡萄糖分子組成的一個(gè)非還原性雙糖,能夠在高溫、高寒、高滲透壓及干燥失水等惡劣環(huán)境條件下在細(xì)胞表面形成du特的保護(hù)膜,有效地保護(hù)生物分子結(jié)構(gòu)不被破壞,從而維持生命體的生命過程和生物特征。 植物體內(nèi)主要以葡萄糖為底物合成海藻糖,海藻糖-6-磷酸酯酶 (trehalose 6-phosphate phosphatase,TPP)是該途徑中海藻糖合成關(guān)鍵酶之一,該反應(yīng)首先在海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate synthase,TPS)的作用下,催化尿苷二磷酸葡萄糖(UDPG)和 6-磷酸葡萄糖生成中間產(chǎn)物6-磷酸海藻糖,再在TPP的作用下去磷酸化,生成海藻糖。 測定原理: TPP催化海藻糖-6-磷酸產(chǎn)生海藻糖,同時(shí)釋放出磷酸根,使用鉬銻抗比色法測定。 需自備的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測試面廣:可測動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
膜相關(guān)環(huán)指蛋白10抗體荔枝索氏梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
粘膜相關(guān)淋巴組織淋巴瘤轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體東方伊薩酵母庫蚊通用探針法熒光定量PCR試劑盒
粘膜血管定居因子抗體色串孢屬節(jié)片代凡絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
抑癌基因抗體棲果盤孢毛細(xì)線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒
神經(jīng)上皮酪ansuan激酶/癌激酶10抗體停滯棒桿菌山羊皰疹病通用探針法熒光定量PCR試劑盒
MHC I類鏈相關(guān)蛋白A/組織相容性復(fù)合物MHCIa抗體枯草芽孢桿菌枯草亞種霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
中腦核仁蛋白抗體人葡萄球菌節(jié)狀古柏線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
巨噬移動(dòng)抑制因子抗體冰川金色單胞菌白喉棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
巨噬炎癥因子1α抗體 MIP-1α褐紅小孔菌倍贊氏金蠅探針法熒光定量PCR試劑盒
蕈型乙酰受體M1抗體紅細(xì)菌屬肉梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
髓鞘相關(guān)糖蛋白a/b抗體Corynebacterium variabile溶血梭狀芽孢桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
絲裂原活化蛋白激酶激酶1抗體南海雷氏菌貝氏隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
絲裂原活化蛋白激酶激酶2抗體熱橄欖鏈霉菌褐色變種蛇形隱孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
蛋白裂解酶(一種新的癌基因)抗體副豬嗜血桿菌牛棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
髓鞘性蛋白/磷脂性蛋白抗體四川散斑殼激隱核蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
海藻糖6磷酸酯酶(TPP)測試盒微量法通用轉(zhuǎn)錄因子II F肽1(GTF2F1)試劑盒Anti-RNF169 Antibody抗長爪沙鼠IgG
胰島su降解酶(IDE)試劑盒Anti-RNF168 Antibody抗水貂IgG
嗜環(huán)蛋白/親環(huán)suA(CYPA)試劑盒 Anti-RNF31 Antibody驢抗人IgG
脂肪suan結(jié)合蛋白1(FABP1)試劑盒Anti-RNF186 Antibody驢抗IgG
嗜suan粒趨化因子受體(ECFR)試劑盒 Anti-RNF123 Antibody驢抗IgG
性結(jié)合球蛋白(SHBG)試劑盒Anti-RNF43 Antibody鼠抗人IgG單克隆
多巴受體D1(D1R/DRD1)試劑盒 Anti-RNF8 AntibodyPE-Cy5.5標(biāo)記的抗犬IgM
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后