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當(dāng)前位置：北京百奧創(chuàng)新科技有限公司>>技術(shù)文章>>免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)流程是怎樣的呢？
Co-IP全稱Co-Immunoprecipitation，中文學(xué)名免疫共沉淀，是一種以抗體和抗原識(shí)別專一性為基礎(chǔ)，用于研究蛋白質(zhì)之間相互作用的經(jīng)典方法。
通俗點(diǎn)來(lái)說(shuō)，假設(shè)我們需要研究樣品中A蛋白和B蛋白之間是否存在一些相互作用，首先我們通過(guò)合適的方法處理樣本，將蛋白提取出來(lái)（同時(shí)不能破壞蛋白之間的相互作用），然后用預(yù)先結(jié)合了瓊脂糖珠或者磁珠的A蛋白抗體捕獲樣本中的A蛋白，那么與A蛋白結(jié)合的B蛋白也能一起沉淀下來(lái)。再將蛋白從珠子上裂解下來(lái)，對(duì)B蛋白進(jìn)行檢測(cè)，能檢測(cè)到，說(shuō)明B蛋白在之前的沉淀過(guò)程中隨著A蛋白一起被拉下來(lái)了，進(jìn)而證明二者之間存在相互關(guān)系。那么免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)流程是怎樣的呢？一起來(lái)學(xué)習(xí)一下吧！
實(shí)驗(yàn)流程
樣本制備：細(xì)胞樣本，收獲細(xì)胞，加入適量細(xì)胞裂解緩沖液和蛋白酶抑制劑，冰上裂解，超聲破碎，離心取上清。組織樣本，剪碎組織，按組織量加入裂解液和蛋白酶抑制劑，用勻漿液勻漿，直至充分裂解，留心取上清。、
細(xì)胞裂解物預(yù)清除（選做）：向制備好的裂解物中分別加入一定量的protein A和protein G，4°C旋轉(zhuǎn)孵育后，離心取上清。 (目的是去除樣本中能和瓊脂糖珠非特異性吸附的雜質(zhì)，使得后續(xù)結(jié)果更好)
加入A蛋白的IP抗體：按照抗體說(shuō)明書的使用比例，添加一定量的A抗體 (能適用于IP實(shí)驗(yàn))，4°C輕柔混合過(guò)夜。
免疫復(fù)合物沉檢：加入一定量的Protein A和Protein G，4C溫和地混1- 3小時(shí)或過(guò)夜，離心保留沉淀，并清洗沉淀3次。(注意:清洗去上清的時(shí)候需要避免吸走填料)
洗稅與檢測(cè)蛋自：根據(jù)樣本的性質(zhì)和下游檢測(cè)手段，選擇合適的洗脫緩沖液，使用洗脫緩沖液將互作蛋白復(fù)合物與珠子分離。接著進(jìn)行下游檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
以上就是有關(guān)于免疫共沉淀的實(shí)驗(yàn)流程是怎樣的問(wèn)題解答，如果你想了解更多請(qǐng)咨詢百奧創(chuàng)新客服哦！
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