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血清,指血液凝固后,在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因zi后,分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。血清的主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì),包括激素、維生素、轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、微量元素、擴(kuò)散因子和生長因子等細(xì)胞增殖和維持的必需成分,促進(jìn)細(xì)胞生長。那么怎么判斷血清的優(yōu)劣呢?
外觀
顏色:根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對血清質(zhì)量并無直接影響,這個指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,因?yàn)檎嬲奶ヅQ迥δ懿?,紅細(xì)胞容易破裂。
澄清度:高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡,而新生牛血清,相對而言更加粘稠,顏色略深。
血清沉淀:血清有沉淀,是質(zhì)量問題?血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對血清質(zhì)量沒有任何影響,沉淀的產(chǎn)生原因很多,跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān)。雖然沉淀并不直接影響血清的質(zhì)量,但對細(xì)胞的顯微觀察有一定的阻礙。
理化檢測
總蛋白:中國藥典規(guī)定血清中總蛋白含量應(yīng)為35-50g/L。一般胎牛血清的總蛋白含量相對比較低,隨著牛齡增加,血清中蛋白含量也會增加。
血紅蛋白:血紅蛋白的含量經(jīng)常直觀體現(xiàn)在牛血清產(chǎn)品的外觀顏色,血清一般是淡黃色,有時(shí)也會偏紅,這是正?,F(xiàn)象,牛血清中的紅色來自于血紅蛋白中結(jié)合的血紅素。中國藥典規(guī)定血清中血紅蛋白應(yīng)不超過200 mg/L。實(shí)際上,血紅蛋白含量的高低對血清的細(xì)胞培養(yǎng)效果并無直接影響,但良好的生產(chǎn)工藝能降低紅細(xì)胞的溶血。
內(nèi)毒素:內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌破裂后的細(xì)胞壁的成分,不同細(xì)胞在對內(nèi)毒素的耐受性上表現(xiàn)出極大的差異,中國藥典規(guī)定血清內(nèi)毒素含量≤10EU/ml。內(nèi)毒素含量越低,表明血清處理環(huán)境越干凈。
微生物檢測
1、 細(xì)菌、真菌等生物在生產(chǎn)過程中幾乎都能100%控制。
2、 支原體可以通過3次0.1μm無菌過濾去除。
3、 噬菌體主要來源于采血、生產(chǎn)環(huán)境,是否出現(xiàn)噬菌體污染是檢測牛血清加工過程中是否受到外源性污染的一個重要指標(biāo)。
病毒檢測
牛血清富含各種營養(yǎng),如果懷孕母牛本身攜帶有\(zhòng)病毒,血清就會受到污染。因此,從源頭上保證母牛健康、沒有各種傳染病,建立血清溯源機(jī)制,選擇經(jīng)檢疫的正規(guī)渠道的血清,才有質(zhì)量保障。
細(xì)胞增殖測試
血清的成分含量復(fù)雜,不同批次之間也存在差異,為了檢測不同批次血清對特定體外細(xì)胞株生長的效力,需要對每一批次的血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)測試。按照中國藥典要求選取Sp2/0-Ag14進(jìn)行細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),測定細(xì)胞生長曲線、倍增時(shí)間、克隆率及單細(xì)胞增殖率,同時(shí)測試多種常見細(xì)胞系如MRC-5、ST、293T、CHO、VERO等細(xì)胞的生長率,為血清品質(zhì)評估提供多角度參考。
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