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更新時(shí)間:2017-07-06 09:06:22瀏覽次數(shù):426次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)血管通透性測(cè)試染色試劑盒20ml免費(fèi)代測(cè)
細(xì)胞骨架染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
血管通透性測(cè)試染色試劑盒100ml使用說明書實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測(cè)。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)或流式細(xì)胞儀分析。
血管通透性測(cè)試染色試劑盒100ml使用說明書注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測(cè);
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測(cè)。
(7)PI染色時(shí)間過長(zhǎng)有可能造成檢測(cè)的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
HBZY-1(大鼠腎小球系膜細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2
CM-H001人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
NTRK1 Others Canine 狗 TrkA / NTRK1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
SW620細(xì)胞,人結(jié)腸癌細(xì)胞 人黑色素瘤細(xì)胞,HSC1細(xì)胞 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KMY0905
人胚胎,皮膚,肌肉;M-7
ASGR1 Others Mouse 小鼠 ASGPR1 / ASGR1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
小鼠紅白血病細(xì)胞;MEL
IGSF11 Others Human 人 IGSF11 / BTIGSF 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
MDA-MB-231 人癌細(xì)胞
SK-BR-3人腺癌細(xì)胞 SK-BR-3 human breast adenocarcinoma cells DMEM培養(yǎng)基+10%FBS
MIF Protein Mouse 重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白
人胚胎氣管組織來源細(xì)胞;CCC-HBE-2 人肺泡上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL
TGFBR2 Others Cynomolgus 食蟹猴 TGFBR2 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
人成纖維細(xì)胞;HFF
F344大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞 F344 rat bone marrow mesenchymal stem cells
NW38細(xì)胞,人黑色素瘤細(xì)胞 鼠李糖乳桿菌 人神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞;U251
ANGPT2 Protein Mouse 重組小鼠 Angiopoietin-2 / ANG2 / ANGPT2 蛋白 (His 標(biāo)簽)
JEG-3(人絨毛膜癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 IL-21R / Interleukin-21 Receptor 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)
大鼠腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(VCAM-1/CD106)免疫試劑盒 Human VCAM-1 ELISA kit
人抗多發(fā)性肌炎硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)ELISA試劑盒 ,英文名: PM-Scl/PM-1 ELISA Kit
RatInterleukin3,IL-3ELISA試劑盒大鼠白介素3(IL-3)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
humanglutamicaciddecarboxylaseautoantibody,GAD-AbELISA試劑盒人*脫羧酶自身抗體(GAD-Ab)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanInvolucrin,iNVELISAKit人套膜蛋白(iNV)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
小鼠毒性休克綜合征毒素1(TSST-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human acid phosphatase (ACP) ELISA Kit 人酸性磷酸酶(ACP)ELISA試劑盒
Humanplaetfactor3,PF3ELISAKit 人*原片段F1+2(F1+2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanarabinogalactanproteins,AGPsELISA試劑盒人阿拉伯半乳糖蛋白(AGPs)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物游離氨基酸含量熒光定量檢測(cè)試劑盒20次
humanthyroidstimulatingimmunoglobulin,TSIELISAKit人甲狀腺刺激免疫球蛋白(TSI)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
血管通透性測(cè)試染色試劑盒100ml使用說明書兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHCⅡ/RLAⅡ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類(MHCⅠ/RLAⅠ)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
兔脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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