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更新時間:2017-07-06 08:56:38瀏覽次數(shù):267次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)CFSE細胞增殖與毒性檢測試劑盒500T實驗方法實驗操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對于細胞懸液每50~100 萬細胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進行線粒體膜電位的檢測。對于大多數(shù)細胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對于特定的細胞,CCCP 的作用濃度和作用時間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻資料決定。
3、對于懸浮細胞:
(1)取 10~60 萬細胞,重懸于 0.5mL 細胞培養(yǎng)液中,細胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細胞。棄上清,注意盡量不要吸除細胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計檢測或流式細胞儀分析。
CFSE細胞增殖與毒性檢測試劑盒500T實驗方法注意事項
(1)本試劑只適用于實驗,不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對眼睛有刺激作用,使用時需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時請注意避光。在處理和標記時,盡可能在暗處進行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細胞標記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個操作過程動作要盡量輕柔,勿用力吹打細胞,盡量在4℃下操作,以免影響細胞狀態(tài)。
(5)在細胞洗滌的后一步,請盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會影響實驗結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時內(nèi)進行流式檢測。
(7)PI染色時間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機前5分鐘再加入PI染色。
CoC1/DDP(人卵巢耐藥細胞亞株) 5×106cells/瓶×2
CM-R066大鼠膀胱成纖維細胞*培養(yǎng)基100mL
EFNB2 Others Human 人 Ephrin-B2 / EFNB2 人細胞裂解液 (陽性對照)
MGC-803細胞,人胃腺癌細胞 人腦神經(jīng)膠質(zhì)瘤細胞(H4),H4細胞 非洲綠猴腎細胞;VERO
人侵襲性脈絡(luò)膜黑色素瘤細胞;MuM-2C
PVR Others Human 人 PVR / CD155 / NECL5 人細胞裂解液 (陽性對照)
CL-0018A9(小鼠皮下結(jié)締組織細胞)5×106cells/瓶×2
IL13 Others Human 人 IL13 / ALRH CHO細胞裂解液 (陽性對照)
卵巢上皮細胞生長添加物OEpiCGS
瘤牛皮膚細胞;BIN-S1 白血病單核細胞,J-1111細胞 5637(膀胱癌細胞)
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細胞;KM9801
TNFSF11 Others Human 人 TNFSF11 / RANKL / CD254 人細胞裂解液 (陽性對照)
SEMA5A Others Mouse 小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 人細胞裂解液 (陽性對照)
犬腎細胞系/野生型;MDCK/wild
人成纖維細胞*培養(yǎng)基 100mL
C918細胞,人眼脈絡(luò)黑色素瘤細胞 糞腸球菌(高耐) 正常小鼠Sertoli細胞;TM4
CCL16 Protein Human 重組人 CCL16 / HCC-4 / NCC4 蛋白 (His 標簽)
LTEP-a-2(人肺腺癌細胞) 5×106cells/瓶×2 人 CLEC7A / Dectin-1 / CLECSF12 人細胞裂解液 (陽性對照)
小鼠V-Jun肉瘤病毒癌基因同源物(JUN)ELISA試劑盒 ,英文名: JUN ELISA Kit
人血紅蛋白β亞基(HB-β)ELISA檢測試劑盒Humanβ-subunitsofhemoglobin,HB-βELISAKit 96T/48T
大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1/Collagenase I)免疫試劑盒 Rat matrix metalloproteinase 1,MMP-1/Collagenase I ELISA kit
英文名稱RatCCL17ELISAKit大鼠CCL17規(guī)格:96T/48T
蘭花Malmgen培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑
ELISAKitFⅨ人*Ⅸ規(guī)格:48T/96T
小鼠肝脂酶(HL)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Human eosinophil chemotactic factor (ECF) ELISA Kit 人鼠嗜酸粒細胞趨化因子(ECF)ELISA試劑盒
Humanferritin,FEELISAKit 人鐵蛋白(FE)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanAnti-tissuetranGSlutaminaseIgA,tTG-IgAELISA試劑盒人抗組織轉(zhuǎn)*酶抗體IgA(tTG-IgA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物氧化型*(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒50次
HumanTransformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit人轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
CFSE細胞增殖與毒性檢測試劑盒500T實驗方法豚鼠白介素6(IL-6)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豚鼠白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豚鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
豚鼠白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
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