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更新時(shí)間:2017-07-03 14:13:03瀏覽次數(shù):253次
聯(lián)系我時(shí),請(qǐng)告知來自 儀表網(wǎng)細(xì)胞骨架染色試劑盒100T實(shí)驗(yàn)方法
Alamar Blue細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)儲(chǔ)存條件: 2-8℃避光保存。
有效期:一年。
產(chǎn)品簡介:
細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的比色檢測產(chǎn)品。
AlamarBlu是一種氧化還原指示劑,能根據(jù)代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號(hào)。其在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性,而在還原狀態(tài)下,轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物,其吸收峰為530-560nm,而散射峰為590nm。在細(xì)胞增殖過程中,細(xì)胞內(nèi)NADPH/NADP、 FADH/FAD、 FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高,處于還原環(huán)境。攝入細(xì)胞內(nèi)的染料被這些代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中,使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測,吸光度和熒光強(qiáng)度與活性細(xì)胞數(shù)成正比。這種染料經(jīng)過驗(yàn)證安全無毒,用于細(xì)胞活性和細(xì)胞增殖的定量分析以及細(xì)胞因子生物測定和體外細(xì)胞毒性研究。 這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。 受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性,因此對(duì)應(yīng)的信號(hào)較低。
Alamar Blue細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)實(shí)驗(yàn)操作步驟:
1、液的配制:
六孔板每孔所需JC-1 染色工作液的量為 1mL ,其他培養(yǎng)器皿的 JC-1 染色工作液的用量以此類推;對(duì)于細(xì)胞懸液每50~100 萬細(xì)胞需0.5mL JC-1 染色工作液。取適量JC-1 (200×),按照每50μL JC-1(200×)加入 8mL 超純水的比例稀釋JC-1 。劇烈震蕩充分溶解并混勻 JC-1 。然后再加入2mL JC-1 染色緩沖液(5 ×),混勻后即為 JC-1 染色工作液。
2、陽性對(duì)照的設(shè)置:
把試劑盒中提供的CCCP(10mM )*按照1 ∶1000 的比例加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中,稀釋至10uM ,處理細(xì)胞 20 分鐘。隨后按照下述方法裝載 JC-1 ,進(jìn)行線粒體膜電位的檢測。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞,通常10uM CCCP處理 20 分鐘后線粒體的膜電位會(huì)*喪失,JC-1 染色后觀察應(yīng)呈綠色熒光;而正常的細(xì)胞經(jīng)JC-1 染色后應(yīng)顯示紅色熒光。對(duì)于特定的細(xì)胞,CCCP 的作用濃度和作用時(shí)間可能有所不同,需自行參考相關(guān)文獻(xiàn)資料決定。
3、對(duì)于懸浮細(xì)胞:
(1)取 10~60 萬細(xì)胞,重懸于 0.5mL 細(xì)胞培養(yǎng)液中,細(xì)胞培養(yǎng)液中可以含血清和酚紅。
(2)加入 0.5mL JC-1 染色工作液,顛倒數(shù)次混勻。細(xì)胞培養(yǎng)箱中 37 ℃孵育20 分鐘。
(3)在孵育期間,按照每 1mL JC-1 染色緩沖液(5×)加入 4mL 蒸餾水的比例,配制適量的JC-1 染色緩沖液(1×),并放置于冰浴。
(4)37℃孵育結(jié)束后,600g 4 ℃離心3 ~4 分鐘,沉淀細(xì)胞。棄上清,注意盡量不要吸除細(xì)胞。
(5)用JC-1 染色緩沖液(1×)洗滌 2 次:加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。再加入 1mL JC-1 染色緩沖液(1×)重懸細(xì)胞,600g 4 ℃離心 3~4 分鐘,沉淀細(xì)胞,棄上清。
(6)再用適量 JC-1 染色緩沖液(1×)重懸后,用熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡觀察,也可以用熒光分光光度計(jì)檢測或流式細(xì)胞儀分析。
Alamar Blue細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)注意事項(xiàng)
(1)本試劑只適用于實(shí)驗(yàn),不適用于臨床檢測;
(2)PI(propidium iodide,碘化丙錠)有毒性,能通過皮膚吸收,對(duì)眼睛有刺激作用,使用時(shí)需戴手套;
(3)Annexin V-FITC和PI是光敏物質(zhì),在操作時(shí)請(qǐng)注意避光。在處理和標(biāo)記時(shí),盡可能在暗處進(jìn)行。在孵育階段,用鋁箔包裹容器或置于抽屜中。細(xì)胞標(biāo)記后,在暗室內(nèi)用顯微鏡觀察;
(4)整個(gè)操作過程動(dòng)作要盡量輕柔,勿用力吹打細(xì)胞,盡量在4℃下操作,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
(5)在細(xì)胞洗滌的后一步,請(qǐng)盡量將上清棄凈,以免PBS殘留,有可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
(6)為防止熒光衰變,宜在1小時(shí)內(nèi)進(jìn)行流式檢測。
(7)PI染色時(shí)間過長有可能造成檢測的凋亡率偏高,建議首*行Annexin V-FITC染色,短可在上機(jī)前5分鐘再加入PI染色。
狹翅獨(dú)活Heracleum stenopterum Rivulobirin B 9-羥基-4-[(4-甲氧基-7-氧代-7H-呋喃并[3,2-g][1]本并-9-基)氧基]-7H-呋喃并[3,2-g][1]本并-7-酮 194145-29-4 C23H12O9 ≥97.5%
牡荊速VitqxinHPLC≥98%,20mg/支
當(dāng)歸腦 Byakangelicol 26091-79-2 20mg HPLC≥98% 用于含量測定
供檢查用典普羅胺100642-200601常溫,避光100mg
Bismuth Subsalicylate*標(biāo)準(zhǔn)品14882-18-9100mg
145-42-6 ?;悄懰釅A標(biāo)準(zhǔn)品 10mg
蟾毒靈;蟾酥靈Bufalin;ofVenenumBufonis462-1-4HPLC≥98%,20mg/支
Oroxylin A 千層紙素A 480-11-5
Myristyl Alcohol肉豆蔻醇標(biāo)準(zhǔn)品112-72-1 1g肉豆蔻醇標(biāo)準(zhǔn)品
*鹽 42294-03-1 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
138199-71-0 左氧扶沙星標(biāo)準(zhǔn)品 350mg
原人參二醇Protopanaxadiol30636-90-9HPLC≥98%,20mg/支
Tetraxy7nolachnophylluM lactone 5-(2-己炔-1-基)二輕-2(3H)-呋喃同 56407-87-5
xy7noflumetxiazide氫扶甲噻標(biāo)準(zhǔn)品135-09-1 200mg氫扶甲噻標(biāo)準(zhǔn)品
*醇 26146-27-0 HPLC≥98%;10mg 訂購|咨詢
溴代十二烷基*,英文名或英文縮寫:DTAB,級(jí)別:IND,規(guī)格:100克
Maleicacid 100g/250g/500g/1kg Sigma M0375
Benzenesulfonicacid本磺酸500毫克BR,97%
甘安醋芐酯隊(duì)本磺醋鹽 Bqnzyl glycinctq p-toluqnqsulfonctq 1738-76-7
DEAE-葡聚糖凝膠 A-50 DEAE Sephadex A-50 39455-31-7 100G 分離試劑
3-羥基-α-甲基-L-酪酸水合物,英文名或英文縮寫:α-metxyl-L-DOPA,級(jí)別:BR,99%,規(guī)格:250毫克
574-09-4安息香;本偶姻;2-乙氧基-2-本基乙酰本Benzoin etxyl ;2-Ethoxy-1,2-dipxenyl-1-ethanone;PS-8A
pxenYLmetxYLSULFONYLFLUORIDE(PMSF)本蛋白組學(xué)級(jí)白色粉末RTsigma
(溴甲基)環(huán)己烷 (Bromomethyl)cyclohexane,99% 2550-36-9 5G 通用試劑
甘酸 (電泳級(jí)) Glycine (≥99% ,for electrophoresis) 56-40-6 500G 基酸
Alamar Blue細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)1-奈嶙酸鈉鹽0.25毫升保存:-20℃
123-19-34-庚酮;二正丙基甲酮;二丙基酮4-Heptenone;Butyrone;4-Oxoheptane;
2-amino-N-etxyl-4,5,6,7-tetraxy7-benzothiopxene-3-carboxamid 60598-65-4
乙基膦酸二異戊酯 2′,3′,4′-Trimethoxyacetophenone,95% 13909-73-4 5G 通用試劑
1-Boc-4-派啶加醋 N-BOC-pipqridinq-4-cc
我司Alamar Blue細(xì)胞增殖與毒性檢測試劑盒1000T售后服務(wù)本著標(biāo)準(zhǔn)*、質(zhì)量*、服務(wù)*、信譽(yù)*的宗旨,為客戶提供輕松便捷,安全可靠的網(wǎng)上采購模式!我們將竭誠為您服務(wù),咨詢!
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