MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒500T實(shí)驗(yàn)方法使用注意事項(xiàng)
1．微量試劑取用前請離心集液。
2．7-AAD避光保存及使用。
3．7-AAD為潛在致癌物，操作時(shí)請采取防護(hù)措施，穿*、戴手套等。
4．本試劑盒適用于檢測活細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測時(shí)，細(xì)胞數(shù)量不以應(yīng)低于1×105，，不*用于檢測組織樣本。
產(chǎn)品名稱：MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒500T實(shí)驗(yàn)方法
儲(chǔ)存條件： -20℃避光保存。

有效期：一年。

產(chǎn)品簡介：

MTT法細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測。活細(xì)胞的線粒體中存在與NADP相關(guān)的脫氫酶，可將黃色的MTT還原生成結(jié)晶狀的藍(lán)紫色的Formazan，死細(xì)胞無此酶，MTT不被還原。

在特定溶劑存在的情況下，Formazan可以被*溶解。然后通過酶標(biāo)儀可以測定460-630nm波長附近的吸光度。細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。本試劑盒靈敏度高，線性范圍寬，使用方便。

MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒500T實(shí)驗(yàn)方法操作方法
1．懸浮細(xì)胞離心（2000rpm離心5min）收集；貼壁細(xì)胞用*消化收集用PBS洗滌細(xì)胞二次（2000rpm離心5min）收集1~5×105細(xì)胞；
2．加入5μL 7-AAD染液，混勻；室溫、避光、反應(yīng)5～15min；
3．加入500μL的1×Assays Buffer懸浮細(xì)胞；
4．請?jiān)?/span>1 hour內(nèi)，進(jìn)行下述熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀的觀察和檢測。
A．熒光顯微鏡觀察
1．滴一滴上述染色后的細(xì)胞懸液于載玻片上，并用蓋玻片蓋上細(xì)胞；
2．對于貼壁細(xì)胞來說，也可直接用蓋玻片來培養(yǎng)細(xì)胞并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；
（1）將細(xì)胞于蓋玻片上生長，用適當(dāng)?shù)牡蛲稣T導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，并設(shè)立陰性對照組；
（2）用PBS洗滌細(xì)胞兩次；
（3）在500μL 的1×Assays Buffer中加入5μL7-AAD染液，混勻；
（4）將上述溶液滴加于蓋玻片表面，使長有細(xì)胞的蓋玻片表面均勻覆蓋；
（5）避光、室溫反應(yīng)5 min。
3．將蓋玻片倒置于載玻片上，于熒光顯微鏡下觀察激發(fā)波長546nm，發(fā)射波長647 nm，7-AAD熒光信號(hào)呈紅色。
B．流式細(xì)胞儀分析
用流式細(xì)胞儀檢測，激發(fā)波長Ex=546 nm; 發(fā)射波長Em=647 nm。
7-AAD紅色熒光建議使用FL3通道檢測。
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒500T實(shí)驗(yàn)方法實(shí)驗(yàn)步驟
貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上磷脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。
紅景天Rhodiola Crenulata Rhodionin 草質(zhì)素苷 85571-15-9 C21H20O11 ≥98%

屋藥醚內(nèi)酯LindqrcnqHPLC≥98%;20mg/支

阿魏酸;3-甲氧基-4-輕基肉桂酸 Ferulic acid 1135-24-6 20mg HPLC≥98% 用于含量測定

中藥對照藥材豨薟草121472-200501TLC法鑒別

(+)-Taxifolin紫杉葉素純度：≥95%
144701-48-4 *峰檢測對照品標(biāo)準(zhǔn)品 10mg

希薟草Siegesbeckia pubescens none 61395 C17H14O7 ≥95% 東莨菪減(輕溴酸鹽19089

Peucedanol白花前胡醇20mg/支HPLC≥98%

Fenoldopam Mesylate 甲磺酸非諾多泮標(biāo)準(zhǔn)品67227-57-0 200mg甲磺酸非諾多泮標(biāo)準(zhǔn)品

多巴 59-92-7 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
流西索米星標(biāo)準(zhǔn)品 ea

原*;原薯蕷皂甙Theoriginaldioscin,protodioscin;22026-80-9HPLC≥98%,20mg/支

Aliarin 5,7-二輕基-2-[4-輕基-3-(4-輕基-3-甲基丁基)本基]-3,6-二甲氧基-4H-1-本并-4-同 84294-77-9

左卡巴斯汀相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品80139-91-9 50mg

輕臭高烏甲素 97792-45-5 HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
溴化金shēng huà shì jì容量：500克

135-53-52,3-二羥基-6-磺酸鈉wo7ium 2,3-dixy7noxy-6-sulfonate

COLUMNREGENERATIONKIT柱再生試劑01kitRT

醋-2-丁氧基酯 2-Butoxyqthyl ccqtctq 11-07-

L-脯酸甲酯鹽酸鹽5克RT，避光
3-甲氧基酚500克

崩潰酶(+4℃)NA

糖、醇發(fā)酵培養(yǎng)基基礎(chǔ)shēng huà shì jì容量：RT500克

鄰硝基苯-β-D-... 2-Nitrophenyl β-D-glucopyranoside 2816-24-2 100MG 通用試劑

茉莉香精 Jcsminq flcvour
MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測試劑盒500T實(shí)驗(yàn)方法Aldosterone醛甾酮100克4N

7585-39-9β-環(huán)糊精Beta Cyclodextrin;CycloMaltoheptaose

Oligomycin寡霉素100uV型，牛跟踺

乙基溴化 Ethyl Bromide solution 925-90-6 100ML 通用試劑

多聚-L-賴酸 (分... Poly-L-lysine hydrobromide 25988-63-0 25MG 基酸