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如何選擇細胞培養(yǎng)的冷凍保護劑?

時間:2017-9-25閱讀:239
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冷凍保護劑是指可以保護細胞培養(yǎng)免受冷凍損傷的物質(zhì)。冷凍保護劑常常配制成一定的溶液。一般來講,只有紅細胞、大多數(shù)微生物和極少數(shù)有核的哺乳動物細胞懸浮在不加冷凍保護劑的水或簡單的鹽溶液中,并以適的冷凍速率冷凍,可以獲得活的凍存物。
但對于大多數(shù)有核哺乳動物細胞來說,在不加冷凍保護劑的情況下,無適冷凍速率可言,也不能獲得活的冷凍物。例如將小鼠骨髓細胞懸浮在不加冷凍保護劑的*中,并以0.3~600℃/min 的冷凍速率降溫冷凍,98% 以上的細胞會死亡;而加入甘油冷凍保護劑進行冷凍保存時,98% 以上的細胞都可存活。
冷凍保護劑可分為滲透性和非滲透性兩類。
滲透性冷凍保護劑
滲透性冷凍保護劑可以滲透到細胞內(nèi),一般是一些小分子物質(zhì),主要包括甘油、DMSO、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇等。其保護機制是在細胞冷凍懸液*凝固之前,滲透到細胞內(nèi),在細胞內(nèi)外產(chǎn)生一定的摩爾濃度,降低細胞內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度,從而保護細胞免受高濃度電解質(zhì)的損傷,同時,細胞內(nèi)水分也不會過分外滲,避免了細胞過分脫水皺縮。
甘油和DMSO并不防止細胞內(nèi)結(jié)冰,在使用該類冷凍保護劑時,需要一定的時間進行預(yù)冷,讓甘油或DMSO等成分滲透到細胞內(nèi),在細胞培養(yǎng)內(nèi)外達到平衡以起到充分的保護作用。
目前DMSO的應(yīng)用比甘油更為廣泛,但要注意的是,DMSO在常溫下對細胞的毒性作用較大,而在4℃時,其毒性作用大大減弱,且仍能以較快的速度滲透到細胞內(nèi)。所以,凍存時DMSO平衡多在4℃下進行,一般需要40~60分鐘。
非滲透性冷凍保護劑
非滲透性冷凍保護劑不能滲透到細胞內(nèi),一般是些大分子物質(zhì),主要包括聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、蔗糖、聚乙二醇、葡聚糖、白蛋白以及*等。其保護機制的假說很多,其中有一種可能是,聚乙烯吡咯烷酮等大分子物質(zhì)可以優(yōu)先同溶液中水分子結(jié)合,降低溶液中自由水的含量,使冰點降低,減少冰晶的形成;同時,由于其分子量大,使溶液中電解質(zhì)濃度降低,從而減輕溶質(zhì)損傷。
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    含量測定    *    50mg
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    檢查用    *    50mg
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    含量測定    *    100mg
進口/國產(chǎn)    2-8℃,避光    規(guī)格:    含量測定    重酒石酸*    100mg
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    含量測定    *    100mg
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    含量測定    *       100mg
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    含量測定    *    100mg
進口/國產(chǎn)    常溫,避光    規(guī)格:    檢查用    *    50mg
細胞培養(yǎng) 

 

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