1 免疫組織化學(xué)結(jié)果

CD68定位于細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞質(zhì), 陽(yáng)性染色為棕黃或棕褐色顆粒, 不著色為陰性。E-cadherin 定位于細(xì)胞膜, 陽(yáng)性染色為棕褐色顆粒; Vimentin定位于細(xì)胞質(zhì), 陽(yáng)性染色為棕褐色顆粒。在癌巢及癌間質(zhì)均有大量CD68陽(yáng)性的細(xì)胞浸潤(rùn), 陽(yáng)性表達(dá)率為80%, 在正常組織中其陽(yáng)性表達(dá)率為25%, 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CD68表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05); 而與患者年齡、腫瘤大小及ER、PR、c-erbB-2等臨床病理特征無(wú)顯著性相關(guān)(P>0.05); 與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(P<0.05), 與 Vimentin表達(dá)呈正相關(guān)。

2 TAMs的分離鑒定

CD68表達(dá)于巨噬細(xì)胞細(xì)胞質(zhì), 陽(yáng)性物質(zhì)在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)染色后發(fā)綠色熒光, PBS為一抗時(shí), 胞漿呈陰性。目前, 通過(guò)對(duì)TAMs的鑒定, 明確 CD68是巨噬細(xì)胞特異性分子標(biāo)志物, 所以CD68陽(yáng)性的細(xì)胞即為癌組織中分離得到的TAMs。

 3 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察倒置顯微鏡觀察兩組MCF-7細(xì)胞的形態(tài), 發(fā)現(xiàn)對(duì)照組細(xì)胞較鈍圓, 排列緊密, 融合度高; TAMs條件培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞, 細(xì)胞偽足不同程度地增多, 細(xì)胞變得細(xì)長(zhǎng)呈梭形, 細(xì)胞間融合度降低。

4 TAMs條件培養(yǎng)基能夠促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的體外侵襲轉(zhuǎn)移能力

結(jié)果顯示, 加入TAMs條件培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)組中遷移細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)比對(duì)照組顯著增加; 對(duì)照組穿透基質(zhì)膜細(xì)胞數(shù)為(76±6)個(gè), 實(shí)驗(yàn)組為(115±5)個(gè), 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。TAMs條件培養(yǎng)基能夠增強(qiáng)MCF-7細(xì)胞的體外侵襲轉(zhuǎn)移能力。

5 Western blot檢測(cè)MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)中E-cadherin 及Vimentin蛋白的表達(dá)

檢測(cè)結(jié)果顯示, 實(shí)驗(yàn)組MCF-7細(xì)胞經(jīng)過(guò)TAMs條件培養(yǎng)基的培養(yǎng)后, E-cadherin表達(dá)量比對(duì)照組明顯減少, 而Vimentin表達(dá)量明顯增多。
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC  熒光素標(biāo)記CD244抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-CD244/NKR2B4/SLAMF4/FITC  熒光素標(biāo)記CD244抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA  白介素2受體a鏈抗體     0.1ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA /PE-Cy5  熒光素PE-Cy5標(biāo)記兔抗人、大、小鼠白介素2受體a鏈抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA /PE-Cy5  熒光素PE-Cy5標(biāo)記兔抗人、大、小鼠白介素2受體a鏈抗體IgG     0.2ml
規(guī)格：    Multi-class antibodies    Anti-CD25/IL-2RA/FITC  熒光素標(biāo)記CD25/白介素2-受體抗體IgG     0.2ml細(xì)胞培養(yǎng)