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細胞凋亡檢測方法的介紹

時間:2018/4/8閱讀:137
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細胞凋亡檢測可以:
用于腫瘤細胞和組織在內的不同種類病理標本研究;
應用于臨床診療,新藥研制、生物制品開發(fā)、腫瘤放*、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療;
對相關疾病的早期發(fā)現(xiàn)、放*的療效評價具有舉足輕重的地位。
細胞凋亡的檢測方法有很多,下面介紹常用的測定方法。
形態(tài)學檢測法
實驗方法原理
根據(jù)凋亡細胞固有的形態(tài)特征,使用合適的顯微鏡檢測凋亡細胞形態(tài)變化。
光學顯微鏡和倒置顯微鏡
(1)未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
(2)染色細胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細胞核染色質的形態(tài)學改變?yōu)橹笜藖碓u判細胞凋亡的進展情況。
常用的 DNA 特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三種種染料與 DNA 的結合是非嵌入式的,主要結合在 DNA 的 A-T 堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時發(fā)射明亮的藍色熒光。
Hoechst 是與 DNA 特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成 1 mg/ml 的濃度,使用時用 PBS 稀釋,終濃度為 10 ug/ml。
DAPI 為半通透性,用于常規(guī)固定細胞的染色。儲存液用蒸餾水配成 1 mg/ml 的濃度,使用終濃度一般為 10 ug/ml。
結果評判:細胞凋亡檢測過程中細胞核染色質的形態(tài)學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa 期細胞核的染色質高度凝聚、邊緣化;Ⅱb 期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體。
含量測定    100mg    100921-200701    *
    100mg    100922-    鹽酸苯乙雙胍
系統(tǒng)適用性    30mg    100925-200701    7-表-10去乙?;?
系統(tǒng)適用性    30mg    100925-200701    *雜質A
供檢查用    30mg    100926-200701    三尖杉寧堿
供檢查用    30mg    100927-200701    7-表*
含量測定    100mg    100928-200701    * 
含量測定    100mg    100934-200701    雌三醇
含量測定    100mg    100938-200701    *
含量測定    100mg    100939-200701    *
含量測定    100mg    100941-200701    * 
細胞凋亡檢測

 

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