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細(xì)胞凋亡檢測(cè)可以:
用于腫瘤細(xì)胞和組織在內(nèi)的不同種類病理標(biāo)本研究;
應(yīng)用于臨床診療,新藥研制、生物制品開發(fā)、腫瘤放*、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療;
對(duì)相關(guān)疾病的早期發(fā)現(xiàn)、放*的療效評(píng)價(jià)具有舉足輕重的地位。
細(xì)胞凋亡的檢測(cè)方法有很多,下面介紹常用的測(cè)定方法。
形態(tài)學(xué)檢測(cè)法
實(shí)驗(yàn)方法原理
根據(jù)凋亡細(xì)胞固有的形態(tài)特征,使用合適的顯微鏡檢測(cè)凋亡細(xì)胞形態(tài)變化。
光學(xué)顯微鏡和倒置顯微鏡
(1)未染色細(xì)胞:凋亡細(xì)胞的體積變小、變形,細(xì)胞膜完整但出現(xiàn)發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞凋亡晚期可見凋亡小體。貼壁細(xì)胞出現(xiàn)皺縮、變圓、脫落。
(2)染色細(xì)胞:常用姬姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細(xì)胞的染色質(zhì)濃縮、邊緣化,核膜裂解、染色質(zhì)分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態(tài)。
熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變?yōu)橹笜?biāo)來評(píng)判細(xì)胞凋亡的進(jìn)展情況。
常用的 DNA 特異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258),DAPI。三種種染料與 DNA 的結(jié)合是非嵌入式的,主要結(jié)合在 DNA 的 A-T 堿基區(qū)。紫外光激發(fā)時(shí)發(fā)射明亮的藍(lán)色熒光。
Hoechst 是與 DNA 特異結(jié)合的活性染料,儲(chǔ)存液用蒸餾水配成 1 mg/ml 的濃度,使用時(shí)用 PBS 稀釋,終濃度為 10 ug/ml。
DAPI 為半通透性,用于常規(guī)固定細(xì)胞的染色。儲(chǔ)存液用蒸餾水配成 1 mg/ml 的濃度,使用終濃度一般為 10 ug/ml。
結(jié)果評(píng)判:細(xì)胞凋亡檢測(cè)過程中細(xì)胞核染色質(zhì)的形態(tài)學(xué)改變分為三期:Ⅰ期的細(xì)胞核呈波紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質(zhì)出現(xiàn)濃縮狀態(tài);Ⅱa 期細(xì)胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;Ⅱb 期的細(xì)胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。
含量測(cè)定 100mg 100921-200701 *
100mg 100922- 鹽酸苯乙雙胍
系統(tǒng)適用性 30mg 100925-200701 7-表-10去乙酰基*
系統(tǒng)適用性 30mg 100925-200701 *雜質(zhì)A
供檢查用 30mg 100926-200701 三尖杉寧堿
供檢查用 30mg 100927-200701 7-表*
含量測(cè)定 100mg 100928-200701 *
含量測(cè)定 100mg 100934-200701 雌三醇
含量測(cè)定 100mg 100938-200701 *
含量測(cè)定 100mg 100939-200701 *
含量測(cè)定 100mg 100941-200701 *
細(xì)胞凋亡檢測(cè)
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