細胞培養(yǎng)與單層細胞培養(yǎng)相比有很多優(yōu)點。其中大的優(yōu)勢是,傳代時只需要對細胞進行稀釋即可,由于不存在蛋白水解酶、機械力等造成的創(chuàng)傷,傳代后基本不會影響細胞生長速率。此外,懸浮培養(yǎng)的細胞能充分利用培養(yǎng)空間,而且能夠非常直觀觀察到細胞規(guī)模擴大。細胞可以在類似于培養(yǎng)酵母菌或細菌的發(fā)酵罐樣的生物反應器內(nèi)大規(guī)模擴增。
根據(jù)細胞類型不同,懸浮培養(yǎng)的接種密度通常介于2× 104 cells/ml到5 × 105 cells/ml之間,有些細胞甚至可以達到2 x 106 cells/ml。如果細胞接種密度過低,他們將經(jīng)歷一個生長停滯期,細胞生長十分緩慢甚至全部死亡。但是如果接種密度過高的話,細胞會很快將培養(yǎng)基內(nèi)的營養(yǎng)成分耗竭,然后突然死亡。請參照說明書了解推薦接種密度、傳代比例、培養(yǎng)基更換時間表以及推薦使用的培養(yǎng)基等具體信息。
懸浮培養(yǎng)細胞傳代步驟:
1.事先將*培養(yǎng)基自冰箱內(nèi)拿出,平衡至室溫。
2.使用移液槍吹打重懸培養(yǎng)在靜置培養(yǎng)容器內(nèi)的細胞,使細胞懸液充分混勻。取適量細胞懸液用血球計數(shù)板計算細胞密度。
3. 根據(jù)說明書推薦的低接種密度及步驟2算出的細胞密度,計算需要接種到新培養(yǎng)容器內(nèi)的細胞懸液體積以及需要加入的新鮮培養(yǎng)基的量。
4. 在新的培養(yǎng)容器內(nèi)加入步驟3計算出的所需添加的新鮮培養(yǎng)基及細胞懸液。如有必要,可在培養(yǎng)容器內(nèi)充滿無菌過濾的CO2,封好培養(yǎng)容器并置于合適的溫度下孵育培養(yǎng)。
5. 通常情況下,細胞培養(yǎng)換液時不需要每次都*更換成新的培養(yǎng)基,除非細胞密度非常高或者是培養(yǎng)基的pH偏酸性(培養(yǎng)基顏色偏黃)。如需*更換培養(yǎng)液,將細胞懸液在125g離心力下離心10 min,吸棄舊培養(yǎng)基,然后使用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞。
含量測定 百秋李醇 對照品 110772-200404 30mg
含量測定 阿魏酸 對照品 110773-9910 50mg
含量測定 青藤堿 對照品 110774-200507 20mg
含量測定 胡椒堿 對照品 110775-200203 20mg
含量測定 香草酸 對照品 110776-200402 50mg
含量測定 柴胡皂苷a 對照品 110777-200405 20mg
含量測定 柴胡皂苷d 對照品 110778-200404 20mg
含量測定 氧化* 對照品 110780-200405 20mg
含量測定 黃芪甲苷 對照品 110781-200512 20mg
細胞培養(yǎng)
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