1.不同的細(xì)胞培養(yǎng)，喜歡的環(huán)境是不一樣的。 這個(gè)不僅僅是說培養(yǎng)基的不同，還有就是細(xì)胞生長(zhǎng)的空間密度問題。 有一些細(xì)胞是數(shù)量多一點(diǎn)比較好生長(zhǎng)，生長(zhǎng)狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞。譬如內(nèi)皮細(xì)胞。而有一些是細(xì)胞是數(shù)量少一點(diǎn)細(xì)胞狀態(tài)會(huì)生長(zhǎng)的比較好，譬如巨噬細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞。尤其是巨噬細(xì)胞，生長(zhǎng)速度非常得快，貼壁速度很快，所以傳代時(shí)就應(yīng)該留很少量的細(xì)胞，這樣細(xì)胞狀態(tài)會(huì)比較好。并且巨噬細(xì)胞比較喜歡扎堆生長(zhǎng)，而堆與堆之間是有空間的。如果長(zhǎng)成相連在一起的一滿片的時(shí)候，細(xì)胞形態(tài)基本上就會(huì)差了，老化的會(huì)比較多，對(duì)后期實(shí)驗(yàn)結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細(xì)胞的時(shí)候應(yīng)該摸索該細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)空間密度問題。
2.對(duì)于有些人總是會(huì)遇到養(yǎng)的細(xì)胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個(gè)其實(shí)是有一個(gè)方法可以改善的。對(duì)于貼壁細(xì)胞，如果細(xì)胞形態(tài)不好，（或者細(xì)胞形態(tài)不清晰，表面似有異物等）可以在傳代的時(shí)候進(jìn)行如下操作： 首先，倒掉舊的培養(yǎng)基，加入3ml新的培養(yǎng)基（有無血清的都可）洗滌一次，用滴管吸走，然后再加入3ml的培養(yǎng)基，進(jìn)行預(yù)吹打，控制吹打力度，輕輕地大概沿著瓶底過一遍，然后吸走。這時(shí)侯再開始正式的消化、吹打。（巨噬細(xì)胞我們只吹打，不消化的） 其次，把吹打下來的細(xì)胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，按時(shí)間點(diǎn)觀察細(xì)胞貼壁情況。10分鐘觀察一次，20分鐘，30分鐘觀察一次。選擇一個(gè)時(shí)間點(diǎn)，已經(jīng)有部分細(xì)胞貼壁的情況下，重新置于潔凈臺(tái)，底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基，加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入*培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。 如果一次效果還不理想，可重復(fù)多次。直到找到細(xì)胞形態(tài)。其中要注意，結(jié)合細(xì)胞喜歡的生長(zhǎng)情況。喜歡多一點(diǎn)數(shù)量長(zhǎng)得好的細(xì)胞你就等貼壁細(xì)胞比較多點(diǎn)的時(shí)候再傳。
3.關(guān)于培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。 這個(gè)是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細(xì)胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml，大方瓶14ml的。有些細(xì)胞反而是培養(yǎng)基少一點(diǎn)相反細(xì)胞形態(tài)會(huì)長(zhǎng)得比較好。（可能也是競(jìng)爭(zhēng)很大，有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。）對(duì)于生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞，易生長(zhǎng)的細(xì)胞加少一點(diǎn)培養(yǎng)基細(xì)胞形態(tài)會(huì)更好。但是要注意換液掌握。
4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題。 個(gè)人發(fā)現(xiàn)生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在玻璃瓶?jī)?nèi)生長(zhǎng)的狀態(tài)會(huì)比一次性塑料瓶相對(duì)好一些。而對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長(zhǎng)旺盛快速的時(shí)期在玻璃瓶?jī)?nèi)的生長(zhǎng)狀態(tài)也比塑料瓶?jī)?nèi)好。這可能是因?yàn)樗芰掀勘炔Ａ扛菀踪N壁。生長(zhǎng)速度快的細(xì)胞在塑料瓶這種相對(duì)“更安逸”的環(huán)境里反而長(zhǎng)得狀態(tài)不如玻璃瓶好。 所以對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞如果想要更漂亮的細(xì)胞狀態(tài)，塑料瓶比玻璃瓶會(huì)好，對(duì)于生長(zhǎng)速度慢的細(xì)胞，玻璃瓶則會(huì)更好。同樣，對(duì)于同一種細(xì)胞，在其生長(zhǎng)速度慢的時(shí)候，塑料瓶會(huì)好一點(diǎn)，比如剛剛復(fù)蘇的時(shí)候，或者原代培養(yǎng)的時(shí)候。而在其生長(zhǎng)旺盛的時(shí)候，玻璃瓶則相對(duì)會(huì)好一點(diǎn)。
5.傳代時(shí)消化的問題?？梢赃@樣說，對(duì)于需要消化傳代的細(xì)胞，每一次的消化都是對(duì)這個(gè)細(xì)胞存活與否，狀態(tài)好與不好至關(guān)重要的考驗(yàn)。很多同學(xué)都遇到過這個(gè)問題，自己養(yǎng)的細(xì)胞開始的幾代長(zhǎng)的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細(xì)胞不行了，狀態(tài)越來越差勁了。對(duì)于這個(gè)問題，可以非常肯定地說，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細(xì)胞受到較大損傷了。所以，越長(zhǎng)越差。
  在消化的過程中，你加入*后，所有細(xì)胞培養(yǎng)都在被*消化著，但是我們忽視了一個(gè)問題就是，細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)是不一樣的，每一個(gè)細(xì)胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細(xì)胞消化同樣的時(shí)間對(duì)細(xì)胞是不公平的，他們受到了差別待遇當(dāng)然會(huì)有脾氣啊。。。呵呵。我后來對(duì)消化的方法進(jìn)行了改良。爭(zhēng)取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。
含量測(cè)定    100mg    140671-200501    乙酰半*
含量測(cè)定    100mg    140672-200501    N-乙酰-L-*
供鑒別及含量測(cè)定用    100mg    140673-201006    *
鑒別    10mg    140674-200401    *
HPLC法含量測(cè)定    50mg    140675-200803    胞磷*鈉
含量測(cè)定    50mg    140677-200405    L-*
含量測(cè)定    100mg    140680-201002    L-*
含量測(cè)定    100mg    140681-200401    L-*
含量測(cè)定    100mg    140682-200401    L-*
含量測(cè)定    100mg    140683-200401    L-異*
細(xì)胞培養(yǎng)