當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>熒光定量PCR>> 豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品分類:熒光定量PCR
貨號:CP101081
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點:
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
儲存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
釷試劑質(zhì)量規(guī)格:0.9Thorin 英文名稱RatMaixmetalloproteinase-10—MMP-10ELISAkit大鼠基質(zhì)金屬蛋白酶10(MMP-10)規(guī)格:96T/48T 麥胚凝集素/凝集蛋白(WGA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
美洛昔康(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品Meloxicam 酵母菌SD-LEU培養(yǎng)基100毫升 人整合素α2(ITGA2)試劑盒 Human ITGA2 ELISA kit
鹽酸美金剛胺質(zhì)量規(guī)格:>99%Memantine HCl ELISAKitGlyCAM-1人糖基化依賴的細(xì)胞黏附分子規(guī)格:48T/96T 粒細(xì)胞趨化蛋白-2(GCP-2/CXCL6)ELISA試劑盒 ,英文名: GCP-2/CXCL6 ELISA Kit
鹽酸美金剛(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:含量測定Memantine 小鼠蛋白激酶Cδ(PKCδ)ELISA試劑盒 ,英文名: PKCδ ELISA Kit RatChorionicGonadoophinβ,β-CGELISA試劑盒大鼠絨毛膜促性腺激素β(β-CG)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
硬脂酸鈉(>95%,BR)質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR stearate 大鼠血清總補體(CH50)ELISA檢測試劑盒Rat50%complemehemolysis,CH50ELISAKit 96T/48T Humanai-filaggrinaibody,AFAELISA試劑盒人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
硫代硫酸鈉無水(>98.5%,BC)質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BC thiosulfate anhydrous 人烯(ACR)試劑盒 Human acrolein,ACR ELISA kit HumanBromodeoxyuridine,BrdUELISAKit人溴脫氧核苷尿嘧啶(BrdU)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Sulfo NHS LC Biotin質(zhì)量規(guī)格:BRSulfo NHS LC Biotin RatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKit大鼠腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 人S100B蛋白(S-100B)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
Sulfo NHS SS Biotin質(zhì)量規(guī)格:BRSulfo NHS SS Biotin Murashige&Skoog基礎(chǔ)培養(yǎng)基500毫升溶液/片劑 兔子Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)試劑盒 Rabbit Collagen Type Ⅳ,COL Ⅳ ELISA Kit
豬細(xì)小病毒探針法熒光定量PCR試劑盒諾如病毒GⅠ型RNA恒溫?zé)晒夥z測試劑盒
RNA/DNA提取試劑盒
柱式動物DNA提取試劑盒
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。
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