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上海莼試生物技術有限公司
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摩氏摩根菌探針法熒光定量PCR試劑盒

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產(chǎn)品型號50T

品       牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2020-06-08 10:45:26瀏覽次數(shù):126次

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摩氏摩根菌探針法熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特性: 高特異性:本產(chǎn)品采用熱啟動 DNA 聚合酶,90℃以上 2min 后具有擴增活性,可大大提高 PCR 產(chǎn)物的特 異性。 靈敏度:本產(chǎn)品包含的優(yōu)化的緩沖液可檢測低拷貝數(shù)的模板,且重復性好。 高適用性:本產(chǎn)品可適用于任意熒光定量 PCR 儀。

參數(shù)規(guī)格:

摩氏摩根菌探針法熒光定量PCR試劑盒運輸及保存:低溫運輸,-20℃保存,有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時,由于其濃度較高,一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

產(chǎn)品名稱

摩氏摩根菌探針法熒光定量PCR試劑盒

英文名稱

Morganella morganii

貨號

CP914573

 



原理:
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,產(chǎn)品僅用于科研Z后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法:
在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法:
探針完整時,報告基團發(fā)射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。
特點優(yōu)勢:
    1.   特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學分析,經(jīng)過TIANDZ及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到。
    2.   重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為。
    3.   靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
    4.   實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
 5.   優(yōu)勢1:序列資源豐富,除TIANDZ公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
    6.   優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結果。
使用方法:
一、樣品采集:
1、食品樣品:樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照菌檢驗要求進行。
2、血液樣品:用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL,注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管,立即混勻。
3、糞便樣品:取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品:取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)
1. 注意:由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照,只提供可以直接使用的 DN段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液(用帶芯槍頭,下同)。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照,充分震蕩 1 分鐘,得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用
6. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

標準品  英文名稱:Trichlorfon  :52-68-6

三正丁基氧化磷標準品  英文名稱:Tributyl Phosphine Oxide  :814-29-9

檸檬三丁酯標準品  英文名稱:Tributyl Citrate   :77-94-1

三喋啶標準品  英文名稱:Triamterene   :396-01-0

己曲安德標準品  英文名稱:Triamcinolone Hexacetonide  :5611-51-8

曲安西龍雙醋酯標準品  英文名稱:Triamcinolone Diacetate   :67-78-7

曲安德標準品  英文名稱:Triamcinolone Acetonide  :76-25-5

曲安西龍標準品  英文名稱:Triamcinolone   :124-94-7

三醋精標準品  英文名稱:Triacetin   :102-76-1

孕三烯標準品  英文名稱:Trenbolone CIII  :10161-33-8

海藻糖標準品  英文名稱:Trehalose   :6138-23-4

鹽曲唑標準品  英文名稱:Trazodone Hydrochloride   :25332-39-2

反鉑對照品標準品  英文名稱:Transplatin   :14913-33-8

甲環(huán)標準品  英文名稱:Tranexamic Acid   :1197-18-8

群多普利標準品  英文名稱:Trandolapril   :87679-37-6

真菌/酵母細胞內(nèi)氧化應激活性氧(ROS)高質(zhì)綠色熒光測定試劑盒  進口/國產(chǎn)  規(guī)格:20次

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摩氏摩根菌探針法熒光定量PCR試劑盒4,5-Desisopropylideneopirama 4,5-去亞異丙基托吡酯 規(guī)格:美國進口

R-Hydroxyopirama R-羥基托吡酯 規(guī)格:美國進口

S-Hydroxyopirama S-羥基托吡酯 規(guī)格:美國進口

D-ValacyclovirHydrochloride D-鹽酸伐昔洛韋 規(guī)格:美國進口

ValacyclovirImpuriyF 伐昔洛韋雜質(zhì)F 規(guī)格:美國進口

Valacyclovir-d4,Hydrochloride 鹽酸伐昔洛韋-d4 規(guī)格:美國進口

Valacyclovirhydrochloridehydra 鹽酸伐昔洛韋水合物 規(guī)格:美國進口

17-KeoVecuroniumBromide 17-酮基維庫溴銨 規(guī)格:美國進口

3-DesaceylVecuronium 3-去乙?;S庫溴銨 規(guī)格:美國進口

ZeainribosidemixedIsomers 玉米素核苷同分異構體混合物 規(guī)格:美國進口

rans-Zeainglucoside 反式玉米素葡萄糖苷 規(guī)格:美國進口

cis-Zeain 順式玉米素 規(guī)格:美國進口

rans-Zeainhydrochloride 反式-鹽酸玉米素 規(guī)格:美國進口

Zileuon-d4 齊留通-d4 規(guī)格:美國進口

DesmehylOfloxacinHydrochloride 去甲基鹽酸氧氟沙星 規(guī)格:美國進口

熒光定量PCR實驗步驟:
產(chǎn)品僅用于科研取凍存已裂解的細胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混勻后,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時,先加入無RNA酶的水40μl用槍反復吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。

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