埃希氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。使用本試劑盒提供的陽性對照時(shí)，由于其濃度較高，一定要注意不要污染其他試劑和成分。在專門的區(qū)域操作。

儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測，產(chǎn)品僅用于科研請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
相對定量簡介：
分析方法： ①雙標(biāo)曲法 ②2 － △Ct ③2 － △△Ct ④Pfaffi法
①雙標(biāo)準(zhǔn)曲線法簡介
公式：
優(yōu)點(diǎn)：分析簡單，實(shí)驗(yàn)優(yōu)化簡單
缺點(diǎn)：對每一個(gè)基因，每一輪實(shí)驗(yàn)都必需做標(biāo)準(zhǔn)曲線；必需有固定的標(biāo)準(zhǔn)品做標(biāo)準(zhǔn)曲線；這些標(biāo)準(zhǔn)品并不代表樣品擴(kuò)增的真實(shí)狀態(tài)應(yīng)用：基因表達(dá)調(diào)控研究中與*的兩種相對定量方法之一

樣品要求及注意事項(xiàng)：
1、 如果提供實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)材料必須保證新鮮，請您采樣后立刻放入液氮中速凍或加入樣穩(wěn)定劑，并用干冰運(yùn)輸。
2、 如果樣品可以用Trigol法提總RNA ，也可以將樣品研磨后放在 Trigol中，動植物組織 ： 50～100mg/mlTrigol，貼壁細(xì)胞：10cm2/mlTrigol，懸浮細(xì)胞：5×106動植物，酵母細(xì)胞或細(xì)菌細(xì)胞10×107/mlTrigol。
3、 如果提供RNA或cDNA我們要對您提供的材料進(jìn)行評估。
4、 實(shí)時(shí)熒光定量PCR服務(wù)您一定要提供樣品及要擴(kuò)增基因的詳細(xì)信息。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)產(chǎn)品僅用于科研將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測目的基因擴(kuò)增檢測的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。

Zinc bromide無水溴化250毫升超純

Zinc acetate dihydrate醋10克CP，95%

Zinc亞鉛粉1公斤AR，99%

Zinc片100克BR，95%

Zinc棒50毫升超純，

Zinc25克AR，99%

Z-Gly-Pro-Arg PNA acetate saltZ-甘酰-L-脯酰-L-精酰對鹽5克BR，

Z-Glu-OHN-BOC-L-谷25克BR，

Z-Gln-OHN-氧羰基-L-谷酰100克BR，

Zeocin抗菌素5克USP級，，100-300u/mg

Zeatin植物細(xì)胞分裂素10KUUSP級，98.5%

Zearalanone4,4-二羥基-6-[10 -羥基- 6 -羰基十一基]內(nèi)酯1克分析標(biāo)準(zhǔn)品，90%

Z-D-Pro-OHN-氧羰基-D-脯100克特純，99%

Z-D-Phe-OHN-氧羰基-D-5克特純，99%

遠(yuǎn)志皂苷J(rèn)  英文名稱：Onjisaponin J  號：873334-98-6  規(guī)格：

原金絲桃素  英文名稱：Protohypericin  號：548-03-8  規(guī)格：10mg

寬纓  英文名稱：Eurycomanone  號：84633-29-4  規(guī)格：10mg

風(fēng)輪菜皂苷D  英文名稱：Clinoposaponin D  號：1822328-43-7  規(guī)格：5mg

烏發(fā)醇  英文名稱：UVAOL  號：545-46-0  規(guī)格：5mg

紅毛七皂苷F  英文名稱：Cauloside F  號：60451-47-0  規(guī)格：10mg

蓋爾格拉文  英文名稱：galgravin  號：528-63-2  規(guī)格：10mg

刺五加苷B1  英文名稱：eleutheroside B1  號：16845-16-2  規(guī)格：10mg

甲  英文名稱：Benzoic acid  號：65-85-0  規(guī)格：20mg

表告依春  英文名稱：Goitrine  號：13190-34-6  規(guī)格：20mg
埃希氏菌通用探針法熒光定量PCR試劑盒Fraxinlone　梣酮（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

heaflavin　茶黃素(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

heaflavin-3'-galla　茶黃素-3'-沒食子酸酯　規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品

heaflavin-3-galla　茶黃素-3-沒食子酸酯　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SaikosaponinA　柴胡皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SaikosaponinB2　柴胡皂苷B2（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SaikosaponinC　柴胡皂苷C（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

SaikosaponianD　柴胡皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Hederagenin　常春藤皂苷元(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Hederagenin　常春藤皂苷元　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

EpimedinA　朝藿定A(標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

EpimedinA1　朝藿定A1(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

EpimedinB　朝藿定B（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

EpmedinC　朝藿定C（標(biāo)準(zhǔn)品）　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

Auranio-obusin　橙黃決明素(標(biāo)準(zhǔn)品)　規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品