產(chǎn)品名稱：CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟
英文名字：Cell counting KIT-8 (CCK-8) kit
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟使用說明：
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線（測定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí)）
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量，然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度，一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度，每組3-6個(gè)復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁，然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測定OD 值，制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)（X 軸），OD 值為縱坐標(biāo)（Y 軸）的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量（試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要*，便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。）
二、細(xì)胞活性檢測
1、在96孔板中接種細(xì)胞懸液（100μL/孔）。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)（在37℃,5% CO2的條件下）。
2、向每孔加入10μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測定OD值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值-毒性檢測
1、在96孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)（在37 ℃，5% CO2的條件下）。
2、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間（例如：6、12、24或48小時(shí)）。
3、向每孔加入10 μL CCK-8溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)）。如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。
5、用酶標(biāo)儀測定在450 nm處的吸光度。
6、如果暫時(shí)不測定OD 值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入10μL 0.1M的HCl或者1%SDS(W/V)溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會發(fā)生變化。
活力計(jì)算：.
細(xì)胞活力（％）=[A(加藥)－A(空白)]／[ A(0加藥)－A(空白)]×100
A（加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A（0 加藥）：具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力：細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟注意事項(xiàng)：
①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長時(shí)間。
③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí)，貼壁細(xì)胞的Z小接種量至少為1 ,000個(gè)/孔 (100 μL培養(yǎng)基)。檢測白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/孔 ( 100 μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn)，請先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒有450nm的濾光片，可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片，但是450nm檢測靈敏度Z高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。 
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟產(chǎn)品應(yīng)用：
 對于一些相對特殊的產(chǎn)品，我們會提供產(chǎn)品說明書，里面會對產(chǎn)品溶解性，及我們所能了解的產(chǎn)品應(yīng)用信息，實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行描述，您可以作為參考。對于常見試劑，因?yàn)閼?yīng)用廣泛，一般不提供說明書。如果您在實(shí)驗(yàn)過程中遇到了問題，歡迎與我們討論，我們將盡力幫您解決。
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟分裝及溶液配制：
 您收到貨物后不要自己進(jìn)行分包，因?yàn)榉职h(huán)境、包裝材料等因素可能導(dǎo)致分包后的產(chǎn)品變質(zhì)；如您有特殊包裝要求，請?jiān)谟嗁彆r(shí)候與我們客服代表闡明，當(dāng)然價(jià)格會做適當(dāng)調(diào)整。對于開蓋后，長期未使用的，請務(wù)必重新密封好，建議Parafilm封口膜，并按照相應(yīng)儲存條件使用。如果放置時(shí)間過長，超過產(chǎn)品有效期，建議您重新購買，以免影響實(shí)驗(yàn)質(zhì)量。
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟儲存條件：
 大部分的試劑產(chǎn)品是比較穩(wěn)定的，只要您嚴(yán)格按照產(chǎn)品包裝或者說明書上的儲存條件進(jìn)行儲存，*可以保證其在有效期內(nèi)的正常使用。一般常見儲存條件有零下XX攝氏度，2-8攝氏度，常溫等。特別提醒，對于某些酶類制品，如果儲存條件是2-8攝氏度，不要儲存在零下，否則容易失活，對于某些需要嚴(yán)格避光，防潮，充氮?dú)獗Ｗo(hù)的，接觸空氣或者過分暴露非常容易氧化或者受潮變質(zhì)。
低溫儲存產(chǎn)品，運(yùn)輸途中冷藏問題：
 對于需要低溫儲存的產(chǎn)品，我們在運(yùn)輸時(shí)候都會采用冷藏包裝，但是部分由于外界氣溫過高，運(yùn)輸時(shí)間較長，對于普通冷藏包裝，途中可能會溫度升高，這些都是沒有問題的，因?yàn)檫@種普通冷藏只適用于那些短期內(nèi)（2周）高溫依然穩(wěn)定的產(chǎn)品，建議低溫的儲存條件，只是長期儲存時(shí)候的條件，您可以放心使用。對于某些特殊的產(chǎn)品，如抗體，我們會采用干冰冷藏包裝，確保全程低溫。公司都對產(chǎn)品性狀進(jìn)行了嚴(yán)格的加速穩(wěn)定測試，行業(yè)經(jīng)驗(yàn)豐富。
CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟儲存條件：避光、干燥陰涼處封閉貯存,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混放、混運(yùn)。本品為非危險(xiǎn) 產(chǎn)品可按一般化學(xué)品運(yùn)輸,輕搬動輕放,防止日曬、雨淋！受熱、受潮、受光后易喪失活力,保存期短,因此貯存和運(yùn)輸條件比較苛刻。 
CFN99783    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Dictamnine-CFN99783.html    C12H9NO2    199.21    484-29-7    Dictamnine    Alkaloids    >=98%    20mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99786    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Anemoside-B4-CFN99786.html    C59H96O26    1221.38    129741-57-7    Anemoside B4    Triterpenoids    >=98%    20mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99790    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Cantharidin-CFN99790.html    C10H12O4    196.20    56-25-7    Cantharidin    Monoterpenoids    >=98%    20mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99824    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/alpha-Spinasterol-glucoside-CFN99824.html    C35H58O6    574.8     1745-36-4    alpha-Spinasterol glucoside    Steroids    > 98%    5mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99791    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Norcantharidin-CFN99791.html    C8H8O4    168.15    5442-12-6    Norcantharidin    Monoterpenoids    >=98%    20mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99792    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Phytic-acid-CFN99792.html    C6H18O24P6    660.04    83-86-3    Phytic acid    Miscellaneous    >=94%    20mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99793    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Phytic-acid-sodium-salt-hydrate-CFN99793.html    C6H18O24P6·xNa+·yH2O    660.04    14306-25-3    Phytic acid sodium salt hydrate    Miscellaneous    >=94%    100mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        
CFN99794    http://www.chemfaces。。ｃｏｍ/natural/Humic-acid-sodium-salt-CFN99794.html    C9H8O4Na2    226.14    68131-04-4    Humic acid sodium salt    Miscellaneous    >=98%    100mg                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                        

showing an isoform specific activity. May be required in conjunction with TP73/p73 for initiation of p53/TP53 dependent apoptosis in response to genotoxic insults and the presence of activated oncogenes. Involved in Notch signaling by probably inducing JAG1 and JAG2. Plays a role in the regulation of epithelial morphogenesis. The ratio of DeltaN-type and TA*-type isoforms may govern the maintenance of epithelial stem cell compartments and regulate the initiation of epithelial stratification from the undifferentiated embryonal ectoderm. Required for limb formation from the apical ectodermal ridge.
Subunit : Binds DNA as a homotetramer. Isoform composition of the tetramer may determine transactivation activity. Isoforms Alpha and Gamma interact with HIPK2. Interacts with SSRP1, leading to stimulate coactivator activity. Isoform 1 and isoform 2 interact with WWP1. Interacts with PDS5A. Isoform 5 (via activation domain) interacts with NOC2L.
Subcellular Location : Nucleus.
Tissue Specificity : Widely expressed, notably in heart, kidney, placenta, prostate, skeletal muscle, testis and thymus, although the precise isoform varies CCK-8細(xì)胞增殖及毒性檢測試劑操作步驟according to tissue type. Progenitor cell layers of skin, breast, eye and prostate express high levels of DeltaN-type isoforms. Isoform 10 is predominantly expressed in skin squamous cell carcinomas, but not in normal skin tissues.
Post-translational modifications : May be sumoylated.
Ubiquitinated. Polyubiquitination involves