當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠膀胱上皮細(xì)胞操作
小鼠膀胱上皮細(xì)胞【Mouse Bladder:Normal Bladder Epithelial Cells】 產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠膀胱上皮細(xì)胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-963812 |
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
組蛋白H3-T110酸化檢測試劑盒10/20等 2,4-二氨基-6-苯基-7-蝶啶 2,4-Diamino-6-phenyl-7-pteridinol 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H3-T30酸化檢測試劑盒10/20等 外消旋拉呋替丁 rac Lafutidine 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H3-T450酸化檢測試劑盒10/20等 羅沙替丁 Roxatidine 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H3乙?;瘷z測試劑盒10/20等 普魯卡因青霉素G Penicillin G procaine 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H4-K12乙?;瘷z測試劑盒10/20等 芐星青霉素G Penicillin G benzathine salt 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H4-K16乙?;瘷z測試劑盒10/20等 尼泊金異丁酯-d9 Isobutyl-d9 Paraben 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H4-K20(mono/di/i)化檢測試劑盒10/20等 尼泊金異丁酯 Isobutyl Paraben 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H4-K31(mono)化檢測試劑盒10/20等 尼泊金異丙酯 Isopropyl Paraben 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H4-K5乙?;瘷z測試劑盒10/20等 戊基尼泊金 Pentyl Paraben 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
組蛋白H4-K8乙?;瘷z測試劑盒10/20等 尼泊金丁酯-d9 Butyl-d9 Paraben 質(zhì)量規(guī)格:美國進(jìn)口
MousehighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA試劑盒小鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 米帕明/丙咪嗪 Clomipramine HCL 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
小鼠酸脫氫酶0酸酶(PDP)ELISA試劑盒 ,英文名: PDP ELISA Kit 米帕明/丙咪嗪(標(biāo)準(zhǔn)品) Clomipramine HCL 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人細(xì)胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)ELISA檢測試劑盒Humancytovillin/ezrinELISAKit 96T/48T 硫酸氫氯吡格雷 I型 Clopidogrel Bisulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,I型
大鼠可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)試劑盒 Rat soluble fibrin monomer complex,SFMC ELISA Kit 硫酸氫氯吡格雷 II型(標(biāo)準(zhǔn)品) Clopidogrel Bisulfate 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
英文名稱RatBSAELISAKit大鼠的牛血清白蛋白殘留檢測規(guī)格:96T/48T 硫酸氫氯吡格雷 II型 Clopidogrel Bisulfate 質(zhì)量規(guī)格:含量97.0%-101.5%,II型
金黃色葡萄球菌腸E(Staphylococcusaureus:eerotoxinE)鑒定16SrDNAPCR擴(kuò)增檢測試劑盒20 萘丁美酮/萘普酮 Nabumetone 質(zhì)量規(guī)格:>99%
ELISAKitGROβ/CXCL2/MGSA人生長調(diào)節(jié)致癌基因β規(guī)格:48T/96T 萘丁美酮/萘普酮(標(biāo)準(zhǔn)品) Nabumetone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
小鼠酸脫氫酶激酶同工酶4(PDK4)ELISA試劑盒 ,英文名: PDK4 ELISA Kit 地瑞拉韋 Darunavir 質(zhì)量規(guī)格:>98%
人絲狀血球凝集素(FHA)ELISA檢測試劑盒Humanfilameoushemagglinin,FHAELISAKit 96T/48T 沃氏物 Methoxydienone 質(zhì)量規(guī)格:含量≥85%
大鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒 Rat soluble endothelial protein C receptor,sEPCR ELISA Kit DL-α-羥基戊二酸二鈉 DL-α-Hydroxyglutaric acid di salt 質(zhì)量規(guī)格:98%,GC,進(jìn)分sigma 94577
小鼠膀胱上皮細(xì)胞操作超氧化物歧化酶(SOD)酵母/真菌裂解樣品制備試劑盒50 潑尼松龍鈉 Prednisolone phosphate 質(zhì)量規(guī)格:>97%,USP
超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50 潑尼松龍(標(biāo)準(zhǔn)品) Prednisolone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50 潑尼松龍 Prednisolone 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP/BP
超氧化物歧化酶(SOD)細(xì)菌裂解樣品制備試劑盒50 潑尼松(標(biāo)準(zhǔn)品) Prednisone 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50 潑尼松 Prednisone 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP30,BR
超氧化物歧化酶(SOD)植物裂解樣品制備試劑盒50 蘋果酸脫氫酶(>12,000U/ml,BC) Malate dehydrogenase 質(zhì)量規(guī)格:>12,000U/ml,BC
超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50 蘋果酸舒尼替尼(標(biāo)準(zhǔn)品) Sunitinib Malate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
超氧化物歧化酶(SOD)組織裂解樣品制備試劑盒50 蘋果酸舒尼替尼 Sunitinib Malate 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%,BR
超氧陰離子清除劑TEMPOL溶液1毫升/500毫摩爾 蘋果酸 HPLC≥98% 20mg
沉淀法去內(nèi)試劑盒20 平貝堿甲 HPLC≥98% 20mg
注意事項:
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
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