當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>原代細(xì)胞>> T25m2小鼠肺泡上皮細(xì)胞操作
我公司提供原代細(xì)胞、細(xì)胞系、細(xì)胞株和菌種,細(xì)胞庫管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻(xiàn)和*培養(yǎng)條件。純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
小鼠肺泡上皮細(xì)胞操作 | T25m2 | CS-963784 |
小鼠肺泡上皮細(xì)胞【Mouse Lung: Normal Alveolar Epithelial Cells】產(chǎn)品描述:提供的原代細(xì)胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細(xì)胞的組織采集是根據(jù)國際標(biāo)準(zhǔn)方案進(jìn)行。細(xì)胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM原代細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細(xì)胞生長條件,以降低雜細(xì)胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)的操作流程下,原代細(xì)胞可以保持分化狀態(tài),進(jìn)而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和相應(yīng)的細(xì)胞密度。提供的細(xì)胞有標(biāo)準(zhǔn)的鑒定流程,保證細(xì)胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細(xì)胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務(wù)標(biāo)準(zhǔn)。
保存和應(yīng)用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細(xì)胞,如是新鮮原代細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進(jìn)行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細(xì)胞,客戶收到細(xì)胞后應(yīng)立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進(jìn)行復(fù)蘇。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細(xì)胞密度,細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo),請及時電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)人層粘連蛋白亞基γ-2(LAMC2)試劑盒 Human LAMC2 ELISA Kit 癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷 Decyl β-D-glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人腸道病毒71型(EV71)抗體(IgM)試劑盒 Human eerovirus 71 virus(EV71)aibody(gM)ELISA kit 德羅特韋(GSK-1349572,DTG) Dolutegravir,GSK1349572 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人腸三葉因子(ITF)試劑盒 Human Iestinal efoil factor,ITF ELISA Kit 十二烷基吡喃葡萄糖苷;月桂?;咸烟?/span> Dodecyl glucopyranoside 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
人腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)試劑盒 Human iFABP ELISA Kit 纖維素(20000~30000 mpa.s) Hydroxyethyl Cellulose 質(zhì)量規(guī)格:粘度20000~30000 mpa.s
人超0酸化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)試劑盒 Human hyper phosphorylated MAPT ELISA kit 纖維素(5500-6500 mpa.s) Hydroxyethyl Cellulose 質(zhì)量規(guī)格:粘度5500-6500 mpa.s
人超抗原(Sag)ELISA檢測試劑盒Humansupperaigen,Sag 96T/48T纖維素(40~60 mpa.s) Hydroxyethyl Cellulose 質(zhì)量規(guī)格:粘度40~60 mpa.s
人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 Human high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG) Isopropyl β-D-thiogalactoside 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)試劑盒 Human Ula Sensitive Prostate Specific Aigen,PSA U S ELISA Kit 甘露糖;D-甘露糖 D-Mannose 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
人超敏熱休克蛋白60(HSP-60)試劑盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 60,HSP-60 ELISA Kit D-甘露糖(標(biāo)準(zhǔn)品) D-Mannose 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人超敏熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒 Human Ula Sensitive Heat Shock Protein 70,HSP-70 ELISA Kit N-辛?;?/span>-N-葡糖胺(MEGA-8) N-Octanoyl-N-methylglucamine 質(zhì)量規(guī)格:≥97% ,進(jìn)分
豚鼠卵清蛋白特異性IgG(OVAsIgG)ELISA檢測試劑盒GuineapigovalbuminspecificIgG,OVAsIgGELISAKit 96T/48T 鹽酸噻加賓 Tiagabine HCl 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR
牛球蛋白E(IgE)試劑盒 Bovine IgE ELISA Kit Tigecycline 質(zhì)量規(guī)格:含量>99.0%
英文名稱HumanCyclosporinAELISAKit人環(huán)胞霉素A(CSA)ELISAKit規(guī)格:96T/48T (標(biāo)準(zhǔn)品) Tigecycline 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
動物組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10 替米考星 Tilmicosin 質(zhì)量規(guī)格:干品度≥90.0%,干品含量≥85.0%,USP34
RaeninELISA試劑盒大鼠腎素(Renin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 替米考星(標(biāo)準(zhǔn)品) Tilmicosin 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
小鼠糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA試劑盒 ,英文名: GR-α ELISA Kit 馬來酸噻嗎洛爾 Timolol Maleate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,USP
小鼠層連蛋白/板層素(LN)ELISA檢測試劑盒MouseLaminin,LNELISAkit 96T/48T 馬來酸噻嗎洛爾(標(biāo)準(zhǔn)品) Timolol Maleate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
人骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)試劑盒 Human Osteocalcin/Bone gla protein,OT/BGP ELISA kit 替硝唑 Tinidazole 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP32
ratfollicle-stimulatinghormone,FSHELISAKit大鼠促卵泡素(FSH)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 替硝唑(標(biāo)準(zhǔn)品) Tinidazole 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品
ACTIN(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠)100微升 妥布霉素 Tobramycin Base 質(zhì)量規(guī)格:≥900μg/mg,USP33,BR
小鼠肺泡上皮細(xì)胞操作RatVitaminE,VEELISA試劑盒大鼠維生素E(VE)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹糖異甘草苷;異甘草苷芹糖 Isoliquiritin apioside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatVitaminK1,VK1ELISAKit大鼠維生素K1(VK1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹糖異甘草苷 HPLC≥98% 10mg
RatVitaminK1,VK1ELISA試劑盒大鼠維生素K1(VK1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹糖甘草苷;甘草苷元-7-O-D-芹糖-4’-O-D-葡萄糖苷 Liquiritin apioside 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
RatvonWillebrandFactor,vWFELISAKit大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素O葡萄糖醛酸苷'乙酯 HPLC≥98% 10mg
RatvonWillebrandFactor,vWFELISA試劑盒大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素O葡萄糖醛酸苷 HPLC≥98% 10mg
RatvonWillebrandFactorcleavingprotease,ADAMTS-13/vWF-cpELISAKit大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素OβD吡喃葡萄糖苷 HPLC≥98% 5mg
RatvonWillebrandFactorcleavingprotease,ADAMTS-13/vWF-cpELISA試劑盒大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶(ADAMTS13/vWF-cp)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素C葡萄糖C木糖苷 HPLC≥98% 20mg
RatypsinELISAKit大鼠胰蛋白酶(ypsin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素(標(biāo)準(zhǔn)品) Apigenin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
Ratypsinogenactivationpeptide,TAPELISAKit大鼠胰蛋白酶原激活肽(TAP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素(G鼠李糖)龍膽糖苷 HPLC≥98% 20mg
Ratα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 芹菜素 HPLC≥98% 20mg
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進(jìn)行凍存。
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