當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞,組織提取物>> T25m2大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物說明
我公司提供原代細(xì)胞、細(xì)胞系、細(xì)胞株和菌種,細(xì)胞庫管理規(guī)范,提供的細(xì)胞株背景清楚,提供參考文獻和*培養(yǎng)條件。純度可達(dá) 90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物說明 | T25m2 | CS-964123 |
大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物【Rat Intestine: Normal Rectal Smooth Muscle Cell Derivatives】大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物是從大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取的,大鼠直腸平滑肌細(xì)胞從正常大鼠直腸組織制備。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實驗的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測試劑盒測定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克??;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
細(xì)胞處理:
1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1.棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2.加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3.按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4.將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞處理方法:
以下細(xì)胞處理方法及細(xì)胞說明書僅供參考,具體操作還需要根據(jù)到貨時細(xì)胞密度,細(xì)胞生長狀態(tài)等具體情況,酌情處理,如需要更詳細(xì)技術(shù)指導(dǎo),請及時電話或郵件聯(lián)系。
一.貼壁細(xì)胞
客戶接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
顯微鏡觀察細(xì)胞,當(dāng)細(xì)胞融匯至80%左右(可以傳代的情況下),細(xì)胞應(yīng)該在37度培養(yǎng)箱預(yù)溫1-2h后再做處理。如未達(dá)到細(xì)胞傳代密度,培養(yǎng)瓶應(yīng)預(yù)留一部分培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。
嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,加入適量的0.05%胰酶-EDTA消化細(xì)胞,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2 培養(yǎng)。
二.懸浮細(xì)胞
1. 接收到細(xì)胞,用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是滅菌過的)培養(yǎng)瓶外部。
2. 肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對細(xì)胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細(xì)胞100X ,200X 各一張)。
3. 嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4. 將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒)。
5. 1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。 換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和新鮮培養(yǎng)基,37℃,5%CO2 培養(yǎng)114455-29-7 (d(CH?????D-Ile2,Ile??Arg??Ala-NH??)-Vasopressin 1mg Influenza Virus A甲型流感()病毒H6亞型RT-LAMP試劑盒
114455-29-7 (d(CH?????D-Ile2,Ile??Arg??Ala-NH??)-Vasopressin 5mg Influenza Virus A甲型流感()病毒H6亞型RT-LAMP試劑盒
114471-18-0 BNP (1-32), human 10mg Influenza Virus A甲型流感()病毒H5亞型RT-LAMP試劑盒
114471-18-0 BNP (1-32), human 1mg Influenza Virus A甲型流感()病毒H5N1亞型 RT-LAMP試劑盒
114471-18-0 BNP (1-32), human 25mg Influenza Virus A甲型流感()病毒H5亞型RT-LAMP試劑盒
MDA-MB-468 癌細(xì)胞雷諾嗪Ranolazine HCl質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
HCC827非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 HCC827 cells in human non small cell lung cancer RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS艾力替尼甲磺酸鹽(AST1306)AST-1306 mesylate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
SCGB1A1 Protein Human 重組 Uteroglobin / SCGB1A1 蛋白 (His 標(biāo)簽)拉羅皮蘭,MK0524Laropiprant,MK-0524質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
胚胎肌肉組織來源細(xì)胞;CCC-HSM-2 小氣道平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL鹽酸頭孢噻呋Ceftiofur 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
肺鱗癌細(xì)胞;NCI-H520鹽酸頭孢噻呋(標(biāo)準(zhǔn)品)Ceftiofur 質(zhì)量規(guī)格:含量測定
大鼠直腸平滑肌細(xì)胞提取物說明腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞;786-O [786-0]他莫昔芬質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRTamoxifen
EFNB2 Others Human EphrinB2 / EFNB2 細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 頭孢替安鹽酸鹽質(zhì)量規(guī)格:>800 µg/mg,USPCefotiam
長尾綠猴腎細(xì)胞;4647頭孢替安鹽酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:效價測定Cefotiam
IL21 Others Rat 大鼠 IL21 / Ierleukin 21 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 絡(luò)塞定(標(biāo)準(zhǔn)品)質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品(2E,4S)-4-Hydroxy-3,7-dimethyl-2,6-octadien-1-yl beta-D-glucopyranoside
小腸血管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)三(4,7-二苯基-1,10-菲繞啉酯)釕(1mM 溶液)質(zhì)量規(guī)格:1mM,BCTris(bathophenanthrolinedisulfonate)ruthenium(II) salt solution
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進行細(xì)胞凍存。懸浮細(xì)胞凍存時,應(yīng)將細(xì)胞收集,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,少量保存上清液(防止細(xì)胞吸走),加入部分新鮮培養(yǎng)基,吹打均勻后,加入到凍存管中,在凍存管中加入10%DMSO搖勻后進行凍存。
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