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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>細(xì)胞培養(yǎng)>>細(xì)胞,組織提取物>> T25m2小鼠卵巢組織提取物直銷
收到凍存細(xì)胞的處理方法:
1.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞);
3.在超凈臺(tái)中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞后轉(zhuǎn)入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細(xì)胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
小鼠卵巢組織提取物【Ovarian: Normal Mouse Ovarian Derivatives】卵巢是雌性動(dòng)物的器官。卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素。卵巢位于底的后外側(cè),與盆腔側(cè)壁相接。公司科技提供來(lái)自新鮮或冷凍小鼠卵巢組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達(dá)圖譜分析以及各種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的研究。
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來(lái)合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過(guò)Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
潛在的應(yīng)用: <1>已知基因的PCR克隆;<2>mRNA選擇性剪接;<3>基因克隆與目標(biāo)測(cè)序;<4> Western and Northern Blot;<5>蛋白檢測(cè)與蛋白質(zhì)組學(xué);<6>芯片研究與表達(dá)圖譜。該細(xì)胞只可用于科研,不得用于臨床應(yīng)用。
產(chǎn)品名稱 | 小鼠卵巢組織提取物直銷 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號(hào) | CS-964297 |
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
注意事項(xiàng):
1.接收到細(xì)胞,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過(guò)的)。
3.嚴(yán)格無(wú)菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無(wú)菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
111-87-5 1-Octanol 10mM*1mLinDMSO Babesia trautmanni豬巴貝斯蟲
111-87-5 1-Octanol 1mg Mumps Virus(MV)腮腺炎病毒RT-LAMP試劑盒
1118750-35-8 FITC-εAhx-Antennapedia Homeobox (43-58) amide 0.5mg Babesia trautmanni豬巴貝斯蟲
1118750-35-8 FITC-εAhx-Antennapedia Homeobox (43-58) amide 1mg Babesia perroncitoi柏氏巴貝斯蟲LAMP試劑盒
1118807-13-8 KY 02111 10mg Babesia perroncitoi柏氏巴貝斯蟲LAMP試劑盒
肺細(xì)胞;HLF-a2-芐基咪唑啉2-Benzylimidazoline質(zhì)量規(guī)格:美國(guó)進(jìn)口
GFRA1 Others Canine 狗 GFRA1 / GFR alpha-1 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) Amidopyrine/aminopyrine質(zhì)量規(guī)格:>98%,AR
恒河猴腎細(xì)胞;MMK3血管緊張素IIAngiotensin II質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,BR
Ls-174-T細(xì)胞,結(jié)腸癌細(xì)胞 色素瘤細(xì)胞,SK23細(xì)胞 細(xì)胞;Hela維生素 D3 ((膽骨化醇)Vitamin D3質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)4000萬(wàn)IU/g
HCCC-9810(肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2帕唑帕尼鹽酸鹽Pazopanib HCl質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠卵巢組織提取物直銷小腸粘膜上皮細(xì)胞*培養(yǎng)基 100mL達(dá)托霉素Daptomycin質(zhì)量規(guī)格:≥930μg/mg,BR,可用于細(xì)胞培養(yǎng)
P388細(xì)胞,小鼠白血病細(xì)胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1達(dá)托霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Daptomycin質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定
CCL20 Protein Mouse 重組小鼠 CCL20 / MIP-3 alpha 蛋白 (His 標(biāo)簽)鹽酸柔紅霉素Daunorubicin HCl質(zhì)量規(guī)格:度大于97%含量84.0-102%,USP30
P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 CD1B & B2M Heterodimer 細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) 鹽酸柔紅霉素(標(biāo)準(zhǔn)品)Daunorubicin HCl質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品
結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT 116 [HCT116]鹽酸柔紅霉素(進(jìn)口)Daunorubicin HCl質(zhì)量規(guī)格:USP,進(jìn)分sigmaD8809
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