當前位置:上海莼試生物技術有限公司>>細胞培養(yǎng)>>成纖維細胞抑制劑及其它>> T25m2直腸上皮細胞和直腸腫瘤原代細胞操作
注意事項:
1.接收到細胞,肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色
,顯微鏡觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴格無菌操作,打開細胞培養(yǎng)瓶。
4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細胞。
7.換新的細胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。
產(chǎn)品名稱 | 直腸上皮細胞和直腸腫瘤原代細胞操作 |
規(guī)格 | T25m2 |
貨號 | CS-964416 |
人直腸MatchPair™ :直腸上皮細胞和直腸腫瘤原代細胞【Human Pancreas MatchPair™: Normal Human Pancreatic Epithelial Cells and Pancreatic Carcinoma Cells】產(chǎn)品描述:提供的細胞均來自新鮮組織,提供的細胞均來自新鮮組織,用于培養(yǎng)該細胞的組織采集是根據(jù)國際標準方案進行。細胞的培養(yǎng)采用公司PrimaCellTM細胞培養(yǎng)試劑盒來優(yōu)化目的細胞生長條件,以降低雜細胞的污染,同時保證質(zhì)量的穩(wěn)定。在生物技術部標準的操作流程下,細胞可以保持分化狀態(tài),進而可以用于評估體外藥物模型系統(tǒng)和調(diào)節(jié)特定基因的遺傳功能。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的細胞,如是新鮮細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養(yǎng)基;
2.從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續(xù)暖細胞);
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養(yǎng)基重懸細胞后轉入T25培養(yǎng)瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養(yǎng)基給細胞換液后繼續(xù)培養(yǎng)。
實驗要點及說明:
1.本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細胞培養(yǎng),懸浮細胞可使用滴片法;
2.所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃制造,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;
3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時動作要輕;
4.如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率;
5.如果細胞貼壁生長能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將組織剪成1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
人抗單核細胞抗體(AMA)試劑盒 Human ai-Monocyte aibody,AMA ELISA Kit 27215-14-1新穿心蓮內(nèi)酯規(guī)格 Neoandrographolide
RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit兔血栓素B2(TXB2)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 43043-74-9去氧紫草素廠家 Deoxyshikonin
載玻片細胞CDK3蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒10/20 29782-68-1水飛薊寧說明書 Silydianin
Humanα-Synuclein,α-SYNELISA試劑盒人α突觸核蛋白(α-SYN)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 24063-71-6異莪術烯醇品牌 Isocurcumenol
小鼠組織因子通道抑制因子(TFPI)ELISA試劑盒 ,英文名: TFPI ELISA Kit 952068-64-3巴利森苷D規(guī)格 Parishin D
塔拉薩敏廠家 talatisamine 組織腎素(renin)熒光共振能量轉移法(FRET)定量檢測試劑盒20
薯蕷皂苷元-3-O-β-D-木糖-(1→3)-β-D-葡萄糖苷品牌 diosgenin-3-O-β-D-xylosyl-(1→3)-β-glucoside 組織腎素(renin)活性熒光定量檢測試劑盒20
山麥冬皂苷B品牌 Liriopesides B 組織砷元素比色法定量檢測試劑盒20
三七總皂苷規(guī)格 Panax notoginsenosides 組織傷寒沙門氏菌(SalmonellaTyphi)定性試劑盒20
三七皂苷R2(R型)廠家 R-Notoginsenoside R2 組織傷寒沙門氏菌(SalmonellaTyphi)定量PCR擴增檢測試劑盒20
直腸上皮細胞和直腸腫瘤原代細胞操作IL-1βELISA試劑盒魚類白介素1β規(guī)格:96T/48T 30220-46-3巨大戟醇廠家 Ingenol
小鼠主要堿性蛋白(MBP)ELISA試劑盒 ,英文名: MBP ELISA Kit 42719-32-4具棲冬青苷說明書 Pedunculoside
狀腺原氨酸(T3)ELISA檢測試劑盒Caninei-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T 331-39-5咖啡酸品牌 Caffeic acid
犬透明質(zhì)酸酶4(HAase 4)試劑盒 Canine Hyaluronidase 4,HAase 4 ELISA Kit 117076-54-53’-羥基葛根素規(guī)格 3'-hydroxy Puerarin
英文名稱HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅠELISAKIT人腫瘤壞死因子可溶性受體I(TNFsRI)規(guī)格:96T/48T 3-羥基巴戟醌廠家 3-Hydroxy- morindone
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