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獼猴胚胎來源細(xì)胞操作步驟

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更新時間:2017-05-29 11:10:10瀏覽次數(shù):727次

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細(xì)胞名稱     獼猴胚胎來源細(xì)胞操作步驟
形態(tài)特性      成纖維細(xì)胞樣
生長特性     貼壁生長
特征特性      該細(xì)胞系來源于一雌性獼猴的胚胎組織。由中科院昆明細(xì)胞庫于2015年引進(jìn)。 
培養(yǎng)條件      DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法      1:2傳代;3-4天一次
傳代情況     P3
凍存條件      基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測     熒光法(-)
STR      -
同工酶     無
染色體     
使用權(quán)限     A類
獼猴胚胎來源細(xì)胞操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。
獼猴胚胎來源細(xì)胞操作步驟復(fù)蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實驗。
公司細(xì)胞庫細(xì)胞株種類齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶!
胃泌素/蛙皮素抗體    ,現(xiàn)貨供應(yīng),貨期短,質(zhì)量可靠。僅用于科研實驗不應(yīng)用于臨床。我們用專業(yè)的態(tài)度,*的服務(wù),全程實驗指導(dǎo)。    英文名稱:    Gastrin    胃泌素/蛙皮素抗體    代理品牌有R&D、Santa Cruz、Bipec、Millipore等品牌,品種多達(dá)10000多種。    保存環(huán)境:2-8℃ 短期保存或<-20℃長期保存保存 1 年以上,避免反復(fù)凍融。
G蛋白/鳥苷酸結(jié)合蛋白抗體    ,現(xiàn)貨供應(yīng),貨期短,質(zhì)量可靠。僅用于科研實驗不應(yīng)用于臨床。我們用專業(yè)的態(tài)度,*的服務(wù),全程實驗指導(dǎo)。    英文名稱:    G protein beta subunit GI    G蛋白/鳥苷酸結(jié)合蛋白抗體    代理品牌有R&D、Santa Cruz、Bipec、Millipore等品牌,品種多達(dá)10000多種。    保存環(huán)境:2-8℃ 短期保存或<-20℃長期保存保存 1 年以上,避免反復(fù)凍融。
GDNF家族受體α4抗體 GDNFRα4    ,現(xiàn)貨供應(yīng),貨期短,質(zhì)量可靠。僅用于科研實驗不應(yīng)用于臨床。我們用專業(yè)的態(tài)度,*的服務(wù),全程實驗指導(dǎo)。    英文名稱:    GFRA4    GDNF家族受體α4抗體 GDNFRα4    代理品牌有R&D、Santa Cruz、Bipec、Millipore等品牌,品種多達(dá)10000多種。    保存環(huán)境:2-8℃ 短期保存或<-20℃長期保存保存 1 年以上,避免反復(fù)凍融。
生長抑制DNA損傷基因34抗體    ,現(xiàn)貨供應(yīng),貨期短,質(zhì)量可靠。僅用于科研實驗不應(yīng)用于臨床。我們用專業(yè)的態(tài)度,*的服務(wù),全程實驗指導(dǎo)。    英文名稱:    GADD34    生長抑制DNA損傷基因34抗體    代理品牌有R&D、Santa Cruz、Bipec、Millipore等品牌,品種多達(dá)10000多種。    保存環(huán)境:2-8℃ 短期保存或<-20℃長期保存保存 1 年以上,避免反復(fù)凍融。

sensitive sodium channel subunit gamma; ENaC gamma subunit; ENaCg; ENaCgamma; Epithelial Na(+) channel subunit gamma; Epithelial Na+ channel subunit gamma; Gamma ENaC; Gamma NaCH; Nonvoltage gated sodium channel 1 subunit gamma; PHA 1; PHA1; SCNEG; SCNN 1G; SCNN1G; Sodium channel nonvoltage gated 1 gamma. 
濃    度  1mg/1ml 
規(guī) 格  0.2ml/200μg     
抗體來源  Rabbit  
克隆類型  polyclonal 
交叉反應(yīng)  Human, Mouse, Rat, Dog, Rabbit
產(chǎn)品類型  一抗    
研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 信號轉(zhuǎn)導(dǎo) 通道蛋白 細(xì)胞膜受體  
蛋白分子量  predicted molecular weight: 71kDa 
性    狀  Lyophilized or Liquid 
免 疫 原  KLH conjugated synthetic peptide derived from human ENaCg 
亞    型  IgG 
獼猴胚胎來源細(xì)胞操作步驟純化方法  affinity purified by Protein A 
儲 存 液  0.01M PBS, pH 7.4 with 10 mg/ml BSA and 0.1% Sodium azide 
產(chǎn)品應(yīng)用   WB=1:100-500  ELISA=1:500-1000  IHC-P=1:100-500  IHC-F=1:100-500  Flow-Cyt=1:100-500  IF=1:100-500 
(石蠟切片需做抗原修復(fù)) 

 

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