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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>RNA/DNA提取>> Tris-HCl Buffer
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
具有下列特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | Tris-HCl Buffer |
規(guī)格 | 詳見(jiàn)說(shuō)明 |
貨號(hào) | CP100645 |
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
雌三醇?xì)埩裘嘎?lián)免疫檢測(cè)試劑盒Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside14422
及殘留酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒Dehydroadynerigenin digitaloside526282
倍他米松殘留酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒Deflazacort144847地夫可特
西馬特羅殘留酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒Deferasirox151地拉羅司
β-呋喃果糖苷酶酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒Decoquinate1879癸氧喹酯
小鼠可溶性白介素-2受體 英文名稱: soluble ierleukin-2 recepor 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): sIL-2R Cardenolide B-1 1318158-89-2 中文名: 分子式:C30H44O8
小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)ELISAKit Loxoprofen 68767-14-6 中文名:洛索洛芬 分子式:C15H18O3
小鼠可溶性P-選擇素(mouse sP-Selectin/sCD62P) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 Ethyl 13-hydroxy-α-linolenate 中文名: 分子式:C20H34O3 度:%
小鼠可溶性L-選擇素 英文名稱: soluble L-Selectin 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫(xiě): sL-Selectin/sCD62L Domperidone 57808-66-9 中文名:多潘立酮 分子式:C22H24ClN5O2
小鼠可溶性E選擇素(sE-selectin)ELISA試劑盒 Ethyl (9Z,11E)-13-hydroxyoctadeca-9,11-dienoate 中文名: 分子式:C20H36O3 度:97.0%
Tris-HCl Buffer表兒茶素O(''O)沒(méi)食子酸酯 HPLC≥95% 20mg 小鼠細(xì)胞色素C氧化酶亞基Ⅲ(COX3)ELISA試劑盒 ,英文名: COX3 ELISA Kit
表沒(méi)食子兒茶素O(''O)沒(méi)食子酸酯 HPLC≥95% 20mg 兔血清(NO)ELISA檢測(cè)試劑盒Rabbitniicoxide,NOELISAKit 96T/48T
雷公藤酚A HPLC≥95% 20mg 牛血清白蛋白(BSA)抗體(IgA)試劑盒 Bovine serum albumin(BSA)aibody(IgA)ELISA Kit
澤拉木醛 HPLC≥95% 20mg 英文名稱HumanHRAbIgMELISAKit人抗心肌抗體IgM(HRAbIgM)規(guī)格:96T/48T
alpha羥基beta乙酰白樺酸 HPLC≥95% 20mg 等電聚焦蛋白電泳(IEF)標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)水緩沖液50毫升
藤黃酸 HPLC≥95% 20mg RatorphaninFQ/nociceptin,OFQ/NELISA試劑盒大鼠孤腓肽(OFQ/N)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
異新藤黃酸 HPLC≥95% 20mg 小鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒 ,英文名: Cyt-C ELISA Kit
新藤黃酸 HPLC≥98% 20mg 小鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類(MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISA檢測(cè)試劑盒Mousemajorhistocompatibilitycomplex-Ⅱ,MHC-Ⅱ/H-2ⅡELISAKit 96T/48T
異藤黃酸 HPLC≥95% 20mg 人核因子κB(NF-κB)試劑盒 Human NF-κB ELISA Kit
Ralpha羥基表藤黃酸 HPLC≥95% 20mg RatCytochrome-C,Cyt-CELISAKit大鼠細(xì)胞色素C(Cyt-C)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
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