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當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測(cè)試劑盒>>RNA/DNA提取>> HEPES Buffer(HEPES緩沖液)
具有下列特點(diǎn):
1.即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡(jiǎn)單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過(guò)優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長(zhǎng)度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | HEPES Buffer(HEPES緩沖液) |
規(guī)格 | 詳見(jiàn)說(shuō)明 |
貨號(hào) | CP100691 |
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過(guò)多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開(kāi)始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
特點(diǎn)優(yōu)勢(shì):
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過(guò)詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過(guò)GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì),確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測(cè),特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過(guò)大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對(duì)檢測(cè)菌的高靈敏檢測(cè),當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對(duì)其的直接檢測(cè),無(wú)需繁瑣的增菌過(guò)程。
4. 實(shí)用性:檢測(cè)范圍廣,涵蓋了對(duì)人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對(duì)臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測(cè),整個(gè)檢測(cè)過(guò)程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢(shì)1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢(shì)2:該系列試劑盒均經(jīng)過(guò)大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測(cè)試劑盒均經(jīng)過(guò)了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過(guò)程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽(yáng)性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
Triton X00 曲拉通X00 0ml Oxytetracycline 586鹽酸土霉素
Trypan Blue 臺(tái)盼藍(lán);曲利苯藍(lán);直接藍(lán)14 5g/Flumequine428355氟甲喹
Tryptone 胰蛋白胨 0g Valnemulin 1338686鹽酸沃尼妙林
TTC 氯化三苯四氮唑 5g/2-Chloromethyl-methyl-(2,2,2-trifluoroethoxy)pyridine 127337-
Tween0 吐溫0 0ml Rizatriptan benzoate14526苯甲酸利扎曲坦
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-9 英文名稱: maix metalloproteinase 9 規(guī)格: 48T/96T 英文縮寫: MMP-9 Diphenhydramine 147-24-0 中文名:鹽酸苯海拉明 分子式:C17H22ClNO 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶8/中性粒細(xì)胞膠原酶(MMP-8)ELISA試劑盒 D-Mannitol diacetonide 1707-77-3 中文名: 分子式:C12H22O6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP-7)ELISA試劑盒 D-Mannitol diacetonide 1707-77-3 中文名: 分子式:C12H22O6
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶4(MMP-4)ELISA試劑盒 DL-2-Amino-n-octanoic acid 中文名:DL-2-氨基正辛酸 分子式:C8H17NO2 度:98.0%
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶-3(mouse MMP-3) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 Dioxopromethazine 15374-15-9 中文名:鹽酸二氧丙嗪 分子式:C17H21ClN2O2S 度:99.0%
HEPES Buffer(HEPES緩沖液)阿侖鈉 Alendronate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 動(dòng)物肝星狀細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒5
別嘌醇 Allopurinol 質(zhì)量規(guī)格:>99%,超 Ratplatelet-derivedgrowthfactor-BB,PDGF-BBELISA試劑盒大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子BB(PDGF-BB)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
別嘌醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Allopurinol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ()ELISA試劑盒 ,英文名: ELISA Kit
烯丙基雌醇;烯丙雌醇 Allylestrenol 質(zhì)量規(guī)格:含量≥98.0% 兔血栓素B2(TXB2)ELISA檢測(cè)試劑盒RabbitThromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 96T/48T
烯丙基雌醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Allylestrenol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥97.0%,標(biāo)準(zhǔn)品 牛肉堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-II(CPT-II)試劑盒 Bovine carnitine palmitoylansferase II,CPT-II ELISA kit
前列地爾,前列腺素E1 Alprostadil,PGE1, 質(zhì)量規(guī)格:>95%,BR,USP30 英文名稱HumanCKMBELISAKit人激動(dòng)異構(gòu)酶MB(CKMB)規(guī)格:96T/48T
四烯雌酮,烯丙孕素 Altrenogest 質(zhì)量規(guī)格:> 99% 動(dòng)物肝組織細(xì)胞分離培養(yǎng)試劑盒10
四烯雌酮,烯丙孕素(標(biāo)準(zhǔn)品) Altrenogest 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 RatpregnancyassociatedplasmaproteinA,PAPP-AELISA試劑盒大鼠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸金剛烷胺 Amantadine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 小鼠脫氧膠原交聯(lián)(DPD)ELISA試劑盒 ,英文名: DPD ELISA Kit
鹽酸金剛烷胺(標(biāo)準(zhǔn)品) Amantadine HCl 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)ELISA檢測(cè)試劑盒MouseGranulocyte-MacrophageColonyStimulatingFactor,GM-CSFELISAKit 96T/48T
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無(wú)色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無(wú)RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見(jiàn)的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無(wú)RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
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