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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3操作步驟

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更新時(shí)間:2017-05-18 17:22:21瀏覽次數(shù):130次

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小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3操作步驟現(xiàn)貨供應(yīng),質(zhì)量有保證、*、實(shí)驗(yàn)效果好,同時(shí)我司為您提供價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明,歡迎前來選購!

細(xì)胞名稱      小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3操作步驟
形態(tài)特性       成纖維細(xì)胞樣
生長特性      貼壁生長
特征特性       NIH/3T3是從NIH Swiss小鼠胚胎培養(yǎng)物中建立的高度接觸性抑制的連續(xù)傳代細(xì)胞株。為了培育在形態(tài)學(xué)特征上更適合于進(jìn)行轉(zhuǎn)化分析的亞株,建立的NIH/3T3細(xì)胞株又進(jìn)行了5輪以上亞克隆。該細(xì)胞株對肉瘤病毒的轉(zhuǎn)化灶形成和白血病病毒的繁殖高度敏感,對DNA轉(zhuǎn)化及轉(zhuǎn)染研究十分有用。鼠痘病毒陰性。 
培養(yǎng)條件       DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  胎牛血清,10%
傳代方法       3-5×10(4)活細(xì)胞/cm2
傳代情況      
凍存條件       基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測      培養(yǎng)法(-)
STR      
同工酶      
染色體      
使用權(quán)限      A類
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3操作步驟細(xì)胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時(shí), 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細(xì)胞冷凍管解凍培養(yǎng)時(shí), 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細(xì)胞外, 絕大部分細(xì)胞株(包括懸浮性細(xì)胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細(xì)胞大都無法立即適應(yīng), 造成細(xì)胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質(zhì)對于細(xì)胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細(xì)胞無法存活。
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3操作步驟復(fù)蘇操作要點(diǎn):
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準(zhǔn)備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細(xì)胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細(xì)胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細(xì)胞懸液。
5)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi),補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代,細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
公司細(xì)胞庫細(xì)胞株種類齊全:大鼠腹水癌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株,如:人滑膜細(xì)胞,人胃癌細(xì)胞,人細(xì)胞,人腎近曲小管上皮細(xì)胞,肝癌細(xì)胞,心肌細(xì)胞,子宮內(nèi)膜細(xì)胞等。細(xì)胞狀態(tài)良好,飽滿,光澤度好,*,專業(yè)技術(shù)指導(dǎo),另有細(xì)胞培養(yǎng)類產(chǎn)品胎牛血清、小牛血清、DMSO、雙抗、胰酶、DMEM、1640培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)瓶等產(chǎn)品。歡迎廣大科研用戶!
Nesprin1蛋白(Nesp1)ELISA試劑盒    ,英文名:    Nesp1 ELISA Kit
NEL樣蛋白2(NELL2)ELISA試劑盒    ,英文名:    NELL2 ELISA Kit
Nei內(nèi)切核酸酶Ⅷ樣蛋白1(NEIL1)ELISA試劑盒    ,英文名:    NEIL1 ELISA Kit
Necdin蛋白(NDN)ELISA試劑盒    ,英文名:    NDN ELISA Kit
Nebulette蛋白(NEBL)ELISA試劑盒    ,英文名:    NEBL ELISA Kit
NAP關(guān)聯(lián)蛋白(SNAPAP)ELISA試劑盒    ,英文名:    SNAPAP ELISA Kit
NAD激酶(NADK)ELISA試劑盒    ,英文名:    NADK ELISA Kit
NAD合成酶1(NADSYN1)ELISA試劑盒    ,英文名:    NADSYN1 ELISA Kit
NADP依賴性蘋果酶2(ME2)ELISA試劑盒    ,英文名:    ME2 ELISA Kit
NADH脫氫酶6(ND6)ELISA試劑盒    ,英文名:    ND6 ELISA Kit

大鼠抗心肌抗體(AMA)免疫試劑盒    Rat Anti-myocardial antibody,AMA ELISA Kit
大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)免疫試劑盒    Rat anti-double stranded DNA,dsDNA ELISA KIT
大鼠抗人激素抗體(IgG)免疫試劑盒    Rat anti-human growth hormone antibody IgG ELISA Kit
大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)免疫試劑盒    Rat Anti-Smooth Muscle Antibody,ASMA ELISA Kit
大鼠抗凝血酶受體(ATR)免疫試劑盒    Rat anti-thrombin receptor,ATR ELISA Kit
大鼠抗凝血酶III(AT III)免疫試劑盒    Rat Antithrombin III(AT III)ELISA Kit
小鼠胚胎成纖維細(xì)胞;NIH/3T3操作步驟大鼠抗凝血酶Ⅲ抗體免疫試劑盒    Rat Anti-Thrombin Ⅲ antibody ELISA Kit
大鼠抗內(nèi)皮細(xì)胞抗體(AECA)免疫試劑盒    Rat anti-endothelial cell antibody,AECA ELISA Kit
大鼠抗鏈球菌溶血素O抗體(IgG)免疫試劑盒    Rat anti-streptolysin O antibody IgG ELISA Kit

 

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