當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>RNA/DNA提取>> T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒
特點(diǎn)優(yōu)勢:
1. 特異性:所有產(chǎn)品使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實(shí)現(xiàn)對細(xì)菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達(dá)到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)菌株的驗(yàn)證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細(xì)菌的濃度達(dá)到103cfu/ml時(shí),可實(shí)現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實(shí)用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴(yán)重的17種呼吸道及腸道致病菌,可實(shí)現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個(gè)檢測過程為3-4個(gè)小時(shí)。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進(jìn)行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。
6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的保守性驗(yàn)證及40余種近緣標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床菌株的特異性驗(yàn)證,確保在使用過程中不會(huì)出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報(bào)告結(jié)果。
產(chǎn)品名稱 | T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒 |
規(guī)格 | 詳見說明 |
貨號 | CP100801 |
具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板,操作簡單,定量準(zhǔn)確快速。
2. 引物經(jīng)過優(yōu)化,特異性強(qiáng)。預(yù)期的 PCR 產(chǎn)物長度為 560 bp。
3. PCR mix 中含上樣染料,PCR 后可以直接上樣電泳。
4. 提供陽性對照,便于分析試驗(yàn)結(jié)果。
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
典型的PCR由(1)高溫變性模板;(2)引物與模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán),通過多次循環(huán)反應(yīng),使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。
其主要步驟是:
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下(通常為93℃-94℃)使其變性解成單鏈;
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合,兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長短;
耐熱的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入,以目的基因?yàn)槟0鍙?/span>5’→3’方向延伸,合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
BM100 DNA Marker2ul×4支Ethyl β-D-xylopyranoside67432
2ul×支15,16-DihydroxyoctadecaZ,12Z-dienoic acid11292
DNA MarkerⅠ2ul×4支n-Butyl-β-D-fructopyranoside678847
2ul×支3'-Hydroxygynuramide II1937
DNA Marker Ⅱ2ul×4支Senkyunolide S1727238
小鼠β細(xì)胞素(BTC)ELISA試劑盒 Boc-3-Phenylisoserine 145514-62-1 中文名: 分子式:C14H19NO5 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠β葡萄糖酸苷酶elisa試劑盒 小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠β葡萄糖酸苷酶試劑盒、小鼠β葡萄糖酸苷酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Loperamide 34552-83-5 中文名:鹽酸洛哌丁胺 分子式:C29H34Cl2N2O2
小鼠β葡萄糖酸苷酶(βGD)ELISA試劑盒 Boc-3-Phenylisoserine 145514-62-1 中文名: 分子式:C14H19NO5
小鼠β葡糖苷酶elisa試劑盒 小鼠β葡糖苷酶試劑盒 規(guī)格型號:96T/48T 小鼠β葡糖苷酶試劑盒,規(guī)格型號:96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠β葡糖苷酶試劑盒、小鼠β葡糖苷酶eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 Loperamide 34552-83-5 中文名:鹽酸洛哌丁胺 分子式:C29H34Cl2N2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠β葡糖苷酶(β-glucosidase)ELISA試劑盒 Bisphenol P 中文名:雙酚P 分子式:C24H26O2 度:98.0%
T3體外轉(zhuǎn)錄試劑盒阿扎那韋硫酸鹽 Atazanavir sulfate 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 小鼠干細(xì)胞因子受體(SCFR)ELISA檢測試劑盒MouseStemCellFactorReceptor,SCFRELISAkit 96T/48T
阿扎那韋硫酸鹽(標(biāo)準(zhǔn)品) Atazanavir sulfate 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人甘露糖結(jié)合蛋白/甘露糖結(jié)合凝集素(MBP/MBL)試劑盒 Human MBP/MBL ELISA Kit
亞胺培南-西司他丁鈉 Imipenem and Cilastatin 質(zhì)量規(guī)格:含量:Imipenem≥400μg/mg,Cilastatin(C16H26N2O5S) ≥400μg/mg,USP36 RatinhibinB,INH-BELISAKit大鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
長春西丁,長春西汀 Vinpocetine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BP,BR BrdU標(biāo)記法細(xì)胞繁殖熒光定量檢測試劑盒10/50
苯妥英鈉 Phenytoin 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR Mouseisletcellaibody,ICAELISA試劑盒小鼠胰島細(xì)胞抗體(ICA)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
奧卡西平 Oxcarbazepine 質(zhì)量規(guī)格:≥99.0%,BR 小鼠神經(jīng)趨化蛋白(fractalkine/CX3CL1)ELISA試劑盒 ,英文名: fractalkine/CX3CL1 ELISA Kit
奧卡西平(標(biāo)準(zhǔn)品) Oxcarbazepine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品 雞17-酮類(17-KS)ELISA檢測試劑盒Chicken17-ketosteroids,17-KSELISAKit 96T/48T
金絲桃素(標(biāo)準(zhǔn)品) Hypericin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 人5羥色胺/血清素/血清胺(5HT/ST)抗體(IgG)試劑盒 Human 5HT IgG ELISA Kit
D-葡萄糖-6- D-(+)-Glucopyranose 6-phosphate 質(zhì)量規(guī)格:1M in H2O(260Mg/ml),進(jìn)口原裝 英文名稱MouseIL-1ELISAKit小鼠白介素1(IL-1)規(guī)格:96T/48T
6-葡萄糖三鈉鹽 D-Gluconate 6-phosphate 3 salt 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 冰凍切片組織CDK3蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝?,4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其*溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測定RNA溶液 濃度和純度。
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