當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>PCR檢測試劑盒>>RNA/DNA提取>> 即用型熒光定量PCR試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:即用型熒光定量PCR試劑盒
產(chǎn)品分類:RNA/DNA提取試劑盒
貨號:CP100834
產(chǎn)品規(guī)格:詳見說明
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
產(chǎn)品特點(diǎn):
◇高特異性:與其他病毒無交叉反應(yīng),無非特異性擴(kuò)增;
◇高靈敏度:檢測靈敏度可達(dá)10~100拷貝;
◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時(shí)進(jìn)行多個(gè)檢測;
◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。
儲(chǔ)存條件:
14℃或-20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液:3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
bp Ladder DNA Marker2ul×4支3-Nitropropionic acid483-硝基
2ul×支4-O-(3-nitropropanoyl)corollin1224752
0bp Ladder DNA Marker2ul×4支Senkyunolide G9455洋川芎內(nèi)酯G
2ul×支Senkyunolide C916528洋川芎內(nèi)酯C
0bp Ladder Plus DNA Marker2ul×4支Docosanoic acid1125二十二烷酸
小鼠CD3分子(CD3)ELISAKit Benzofuroxan 480-96-6 中文名:苯并呋咱 分子式:C6H4N2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠CD34(mouse CD34) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 Benzo-18-crown-6 ether 14098-24-9 中文名:苯并-18-冠6-醚 分子式:C16H24O6 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
小鼠CD30分子(CD30)ELISAKit Dehydroherbarin 36379-74-5 中文名: 分子式:C16H14O5
小鼠CD163分子(CD163)Elisa試劑盒 Benzoin methyl ether 中文名:安息香醚 分子式:C15H14O2 度:98.0%
小鼠B因子(BF)ELISA試劑盒 Benzoin methyl ether 中文名:安息香醚 分子式:C15H14O2
即用型熒光定量PCR試劑盒氨苯蝶啶(標(biāo)準(zhǔn)品) Triamterene 質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定 豬凋亡相關(guān)因子(FAS/CD95)ELISA檢測試劑盒PorcineFactor-relatedApoptosis,FASELISAKit 96T/48T
拉呋替丁 Lafutidine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 大鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)試劑盒 Rat neuophil elastase,NE ELISA Kit
拉呋替?。?biāo)準(zhǔn)品) Lafutidine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱HumanStemcellfactor,SCFELISAkit人SCF規(guī)格:96T/48T
托可索侖/維生素E聚乙二醇琥珀酸酯 Tocofersolan,VE-TPGS 質(zhì)量規(guī)格:VE含量≥260.00mg/g as dl-α-tocopherol 動(dòng)物組織活性肌質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10
鹽酸甲氧那明 Methoxyphenamine HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,CP SheepPhosphorylatedadenosinemonophosphateactivatedproteinkinase,AMPKELISA試劑盒綿羊0酸化腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
鹽酸羅沙替丁醋酸酯 Roxatidine acetate HCl 質(zhì)量規(guī)格:>98% 小鼠輕肽神經(jīng)絲蛋白(NEFL)ELISA試劑盒 ,英文名: NEFL ELISA Kit
培美曲塞酸 Pemetrexed 質(zhì)量規(guī)格:>98% 豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA檢測試劑盒PorcineVascularEndothelial-CadherinComplex,VE-cadELISAKit 96T/48T
培美曲塞酸(標(biāo)準(zhǔn)品) Pemetrexed 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 大鼠質(zhì)膜鈣ATP酶(PMCA)試劑盒 Rat Plasma membrane calcium-anspoing ATPase 2,PMCA Elisa kit
周效磺胺(磺胺多辛) sulphadoxine 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 英文名稱HumansCD86ELISAKit人sCD86(sCD86)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
周效磺胺(標(biāo)準(zhǔn)品) sulphadoxine 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 動(dòng)物組織活性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分離試劑盒10
使用方法:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。
8. 如果有 N 個(gè)樣品,則需要進(jìn)行 N+2 個(gè)樣品提取,多出的一個(gè)用作樣品制備陽性對照管、另一個(gè)用作樣品制備陰性對照管。
三、設(shè)置 qPCR 反應(yīng)(20μL 體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+9 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復(fù),則標(biāo)記 N+4 個(gè) PCR 管,其中 N+2 個(gè)用于上步得到的 N+2 個(gè)樣品,1 個(gè)用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個(gè)用于PCR 陽性對照。
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