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細胞名稱 人胚腎細胞;293 Cells, low passage操作步驟
形態(tài)特性 上皮細胞
生長特性 貼壁生長
特征特性 293細胞是人胚胎腎細胞用剪切過的腺病毒5 DNA轉(zhuǎn)化得到。它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1。 它們包含并表達腺病毒5的早期區(qū)段1。 它們能互補E1失活的腺病毒突變株和載體,使其生長。 在DNA轉(zhuǎn)染檢測中它們是特別有效的受體細胞。 對于大多數(shù)即使不是全部人腺病毒的生長和溶菌斑測試,它們也表現(xiàn)很好。 這些細胞廣泛應(yīng)用于因缺失或代換E1序列引起的E1失活突變株和腺病毒載體的繁殖與滴定。 因此它們被用來構(gòu)建腺病毒載體。 用于構(gòu)建腺病毒載體使用低代數(shù)細胞,一般不超過40代。 對于保持這株細胞的優(yōu)良特性,正確
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%
傳代方法 消化3-5分鐘。1:2。3天內(nèi)可長滿。
傳代情況 P(27+5)
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類
人胚腎細胞;293 Cells, low passage操作步驟細胞培養(yǎng)
1、冷凍管應(yīng)如何解凍?
取出冷凍管后, 須立即放入37 ℃水槽中快速解凍, 輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化, 并注意水面不可超過冷凍管蓋沿, 否則易發(fā)生污染情形。另冷凍管由液氮桶中取出解凍時, 必須注意安全, 預(yù)防冷凍管之爆裂。
2、細胞冷凍管解凍培養(yǎng)時, 是否應(yīng)馬上去除DMSO?
除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感之細胞外, 絕大部分細胞株(包括懸浮性細胞), 在解凍之后, 應(yīng)直接放入含有10-15ml新鮮培養(yǎng)基之培養(yǎng)角瓶中, 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可, 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附之問題。
3、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
不能。每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基, 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基, 細胞大都無法立即適應(yīng), 造成細胞無法存活。
4、可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類?
不能。血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源, 所以血清的種類和品質(zhì)對于細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。來自不同物種的血清, 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同,血清使用錯誤常會造成細胞無法存活。
人胚腎細胞;293 Cells, low passage操作步驟復(fù)蘇操作要點:
1)將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi),再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍,使細胞能盡快通過Z易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi),將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi),輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次,均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養(yǎng)基,吹打制成細胞懸液。
5)將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi),補加適量的培養(yǎng)基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng),待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代,細胞活力恢復(fù)后才能進行后續(xù)的實驗。
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小鼠胰島細胞抗體(ICA)免疫試劑盒 Mouse islet cell antibody,ICA ELISA Kit
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小鼠胰蛋白酶(trypsin)免疫試劑盒 Mouse trypsin ELISA Kit
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小鼠葉酸(FA)免疫試劑盒 Mouse Folic acid,FA ELISA Kit
小鼠氧化型谷胱甘肽(GSSG)免疫試劑盒 Mouse oxidizided glutathione,GSSG ELISA Kit
可溶性CD14(sCD14)ELISA試劑盒 ,英文名: sCD14 ELISA Kit
可溶性CD105(sCD105)ELISA試劑盒 ,英文名: sCD105 ELISA Kit
可溶性CD100(sCD100)ELISA試劑盒 ,英文名: sCD100 ELISA Kit
顆粒體蛋白(GRN)ELISA試劑盒 ,英文名: GRN ELISA Kit
顆粒溶素(GNLY)ELISA試劑盒 ,英文名: GNLY ELISA Kit
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人胚腎細胞;293 Cells, low passage操作步驟人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)ELISA試劑盒 ,英文名: anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab ELISA Kit
人抗胰島素受體抗體(AIRA)ELISA試劑盒 ,英文名: AIRA ELISA Kit
人抗胰蛋白酶(AT)ELISA試劑盒 ,英文名: AT ELISA Kit
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