HPASMC：人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞注意事項(xiàng)：
1收到細(xì)胞后當(dāng)天換液，全部更換成客戶自己的新鮮培養(yǎng)基，放進(jìn)培養(yǎng)箱，第二天再消化。
2邊觀察邊消化，根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)，終止消化時(shí)間，采取以半分鐘間隔吹打細(xì)胞邊緣，如可吹打下來，即終止消化?？蛻裘鞅容^好的消化時(shí)間。
3隨細(xì)胞有一份細(xì)胞操作說明書，請(qǐng)客戶仔細(xì)查看。
4記得加1%雙抗，降低被污染的概率。另外盡早凍存留種，以備后用。
5售后時(shí)間為一周，于細(xì)胞本身的質(zhì)量問題，而因乙方自己不當(dāng)操作（不規(guī)范操作，消化過度，不加雙抗導(dǎo)致的污染等）導(dǎo)致的細(xì)胞問題不在售后范疇。
6收到細(xì)胞后，如細(xì)胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快，以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請(qǐng)您務(wù)必重視。
7剛收到細(xì)胞時(shí)，胎牛血清可以用15%培養(yǎng)兩三天，利于細(xì)胞盡快恢復(fù)狀態(tài)，細(xì)胞狀態(tài)穩(wěn)定后，再調(diào)回10%即可。
        【產(chǎn)品規(guī)格】    1*10（6）
        【安全級(jí)別】    1
        【產(chǎn)品種屬】    人
        【組織來源】    肺動(dòng)脈
        【細(xì)胞形態(tài)】    成纖維細(xì)胞樣
        【細(xì)胞特性】    貼壁
        "細(xì)胞培養(yǎng)基的選擇和使用：
MEM：成分簡(jiǎn)單，貼壁細(xì)胞。
DMEM：分高糖型和低糖型。
IDMEM：適合細(xì)胞密度低，生長(zhǎng)困難的細(xì)胞。如雜交細(xì)胞的篩選，DNA轉(zhuǎn)染后轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選培養(yǎng)。
RPM1640：應(yīng)用Z廣泛的培養(yǎng)基之一。懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，主要針對(duì)淋巴細(xì)胞，也適合其他細(xì)胞。
199、109培養(yǎng)基：成分齊全，培養(yǎng)效果較好。
F10培養(yǎng)基：適合小鼠及人類二倍體細(xì)胞培養(yǎng)。
F12培養(yǎng)基：HPASMC：人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞適合單細(xì)胞分離培養(yǎng)及無(wú)血清培養(yǎng)。
         細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌
        【培養(yǎng)條件】    詳見細(xì)胞說明書
        【傳代方法】    建議1:2-1:3 兩天換液一次
        【凍存條件】    詳見細(xì)胞說明書
        【主要文獻(xiàn)】    請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章
細(xì)胞凍存及復(fù)蘇基本知識(shí)普及：
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。
除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來購(gòu)買、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。 
采用"慢凍快融"的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開始為-1 到 -2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)(-196℃)。
HPASMC：人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凍存的步驟
（1）選擇處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，在凍存前一天換液。將多個(gè)培養(yǎng)瓶中的細(xì)胞培養(yǎng)液去掉，用0.25% 胰蛋白酶消化。適時(shí)去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復(fù)吹打瓶壁上的細(xì)胞，使其成為均勻分散的細(xì)胞懸液。懸浮生產(chǎn)細(xì)胞則不要消化處理。然后將細(xì)胞收集于離心管中離心(1000r/min，10分鐘)。
（2）去上清液，加入含20%小牛血清的*培養(yǎng)基，于4℃預(yù)冷15分鐘后，逐滴加入已無(wú)菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細(xì)胞均勻，細(xì)胞濃度為5×106～1×107/mL之間。（凍存培養(yǎng)液的配置是不是一定要用小牛血清呢？答案是不一定的，具體要看培養(yǎng)的細(xì)胞類型來選擇。
（3）將分裝上述細(xì)胞懸液于2ml凍存管中，每管0.25ml。凍存管要將蓋子蓋緊，并標(biāo)記好細(xì)胞名稱和凍存日期，同時(shí)作好登記（日期、細(xì)胞種類及代次、凍存支數(shù)）
（4）將裝好細(xì)胞的凍存管放到凍存盒中，-80℃冰箱過夜。；如果有程序降溫器(放在-80℃冰箱過夜，放入液氮罐);或者可以在4℃，2h;然后轉(zhuǎn)到-20℃，2h;-80℃，2h;放入液氮罐。
（5）細(xì)胞凍存在液氮中可以長(zhǎng)期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只凍存管細(xì)胞復(fù)蘇培養(yǎng)，觀察生長(zhǎng)情況，然后再繼續(xù)凍存。
如何進(jìn)行細(xì)胞復(fù)蘇：
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時(shí)搖動(dòng)令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細(xì)胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻;
3. 離心， 1000rpm，5min;
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
溫馨提醒
1.從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。在凍存前一天換一次培養(yǎng)液;
2.將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作（戴棉手套），以免凍傷;
3.HPASMC：HPASMC：人肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞凍存和復(fù)蘇用新配制的培養(yǎng)液。
細(xì)胞復(fù)蘇的時(shí)候，有些初次實(shí)驗(yàn)員將凍存管從液氮中取出后，放在室溫下，經(jīng)常發(fā)生凍存管爆炸，該怎么避免出現(xiàn)這種情況嗎？其中在擰緊凍存管的時(shí)候是否有哪些細(xì)節(jié)要注意的？