小鼠胚胎成纖維細(xì)胞生長特性復(fù)蘇操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過Z易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
Acc-2(人涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
ACHN(人腎癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
AGS(人胃腺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
Ana-1(小鼠巨噬細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
Anglne(人卵巢癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
AR42J(大鼠胰腺外分泌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
ARPE-19(人視網(wǎng)膜上皮細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
AsPC-1(人胰腺癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
AtT-20(小鼠垂體瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
B16(小鼠黑色素瘤細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2
BEL-7402(人肝癌細(xì)胞)    5×106cells/瓶×2