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上海莼試生物技術(shù)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第9年

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小鼠全段甲狀旁腺素elisa檢測(cè)試劑盒?雙抗體夾心法

時(shí)間:2021/12/22閱讀:247
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小鼠全段甲狀旁腺素elisa檢測(cè)試劑盒雙抗體夾心法:


  雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原zui常用的方法,操作步驟如下:


  (1)將特異性抗體與固相載體連接,形成固相抗體:洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。


  (2)加受檢標(biāo)本:使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間,讓標(biāo)本中的抗原與同相載體上的抗體結(jié)合,形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。


  (3)加酶標(biāo)抗體:使同相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。


  (4)加底物:酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量。


  根據(jù)同樣原理,將大分子抗原分別制備固相抗原和酶標(biāo)抗原結(jié)合物,即可雙抗原夾心法測(cè)定標(biāo)本中的抗體。


  (二)雙位點(diǎn)一步法:


  在雙抗體夾心法測(cè)定抗原時(shí),如應(yīng)用針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相抗體和酶標(biāo)抗體,則在測(cè)定時(shí)可使標(biāo)本的加入和酶標(biāo)抗體的加入兩步并作一步。這種雙位點(diǎn)一步法不但簡(jiǎn)化了操作,


  縮短了反應(yīng)時(shí)間,如果使用高親和力的單克隆抗體,測(cè)定的敏感性和特異性也顯著提高。單克隆抗體的應(yīng)用使測(cè)定抗原的ELISA提高到新水平。


  在一步法測(cè)定中,應(yīng)注意鉤狀效應(yīng)(hook effect),類(lèi)同于沉淀反應(yīng)中抗原過(guò)剩的后滯現(xiàn)象。當(dāng)標(biāo)本中待測(cè)抗原濃度相當(dāng)高時(shí),過(guò)量抗原分別和固相抗體及酶標(biāo)抗體結(jié)合,而不再形成夾心復(fù)合物,所得結(jié)果將低于實(shí)際含量。鉤狀效應(yīng)嚴(yán)重時(shí)甚至可出現(xiàn)假陰性結(jié)果。

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