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大鼠elisa試劑盒抽提過(guò)程中應(yīng)留意:
①一切的處理都需在低溫(4℃)下進(jìn)行,以防蛋白質(zhì)變性:
②若抗原溶液需保存較長(zhǎng)的時(shí)刻,則需加防腐劑(如NaN3)或在凍干狀態(tài)下保存:
③為制備特異性強(qiáng)的抗血清,抗原可用規(guī)范的生化技能進(jìn)行純化:
④如一次不能搜集滿足的抗原,可將每次的蟲(chóng)體保存在-20℃或?qū)⒖乖瓋龈芍钡蕉鸭瘽M足的量。
任何血清學(xué)實(shí)驗(yàn)都依賴于具有價(jià)、特異性強(qiáng)的抗血清的發(fā)生,而抗血清的制備離不開(kāi)抗原的搜集、保存和提取。采回的害蟲(chóng)饑餓24h后,將等體積的磷酸緩沖液(PBS)滴入備用的害蟲(chóng)中,研磨后參加過(guò)量的PBS(PH=7.4),在4℃下拌和24h,然后以4000-5000r/min的速度離心20h,別離上清液。沉渣用上法重復(fù)抽提一次。
將兩次所得的上清液混合后,置于4℃下替換屢次冷鹽水透析24h或48h。透析液用冰凍枯燥法或反透析法進(jìn)行濃縮。濃縮液用紫外分光光度計(jì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量,得到適當(dāng)濃度的蛋白質(zhì)溶液即位抗原。
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