人正常組織細(xì)胞凍存好了，接下來要注意什么問題呢?沒錯，就是記得到時間了，拿出來復(fù)蘇。那么，細(xì)胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細(xì)胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?請看下文：
活力檢查 – 千萬不要使用不健康的細(xì)胞，可能有污染，如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!
形態(tài)檢查 – 檢查細(xì)胞的固有形態(tài)和生長行為。
凍存細(xì)胞：
補充新的培養(yǎng)液 – 在您開始凍存細(xì)胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。
在細(xì)胞長至70%單層時收獲細(xì)胞，計數(shù)活細(xì)胞數(shù)，用凍存液調(diào)整細(xì)胞密度 ~5 x106 cells/ml (根據(jù)不同的細(xì)胞類型調(diào)整)
凍存液 – 用凍存液洗細(xì)胞并用凍存液重懸細(xì)胞，有不同類型的凍存液，根據(jù)細(xì)胞類型選擇Z合適的凍存液:
– 5-10% DMSO – 注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì).
– 5-15% 甘油
– 如果細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長，應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。
在凍存管上標(biāo)記好人正常組織細(xì)胞類型，日期，凍存人等信息，并保證每凍存管不超過1.5ml.
程序降溫是保證凍存細(xì)胞活性的關(guān)鍵，使用 Mr. Frosty保證降溫速度為1°-3°C，置于-80°C冰箱內(nèi)過夜，如果沒有Mr. Frosty裝置，可以使用實驗室常見的泡沫盒、棉花等。.
放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以Z快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi)，因此，此步驟使用干冰，或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意，在凍存管上沒有足夠的空間記錄細(xì)胞的詳細(xì)信息，做好記錄是非常非常重要的!
魚孕激素/孕酮    ELISA.    96T/48T
魚卵黃高磷蛋白    ELISA.    96T/48T
魚磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶    ELISA.    96T/48T
魚類主要組織相容性復(fù)合體    ELISA.    96T/48T
魚類三碘甲狀腺原氨酸(T3)ELISA Kit    ELISA.    96T/48T
人正常組織細(xì)胞