ATCC細胞傳代時間一般通過兩個方面進行確定：一是在細胞培養(yǎng)過程中，當培養(yǎng)液由于pH值下降而呈現(xiàn)黃色時，表明細胞已經(jīng)達到Z大密度，需要換液或進行傳代培養(yǎng)；二是觀察細胞形態(tài)，健康細胞形態(tài)飽滿，折光性好，生長致密時即可傳代。初代培養(yǎng)的傳代很重要，是建立細胞系的關鍵時期。在傳代時一般要特別注意以下3點：

①ATCC細胞沒有生長到足以覆蓋瓶底壁的大部分表面之前，不要急于傳代。

②原代培養(yǎng)時細胞多為混雜生長，上皮樣細胞和成纖維樣細胞并存的情況很常見。傳代時不同的細胞有不同的消化時間，因此要根據(jù)需要，注意觀察及時進行處理，并可根據(jù)不同細胞對胰蛋白酶的耐受時間不同而分離和純化所需要的細胞。另外早期傳代的培養(yǎng)細胞較已經(jīng)建系的培養(yǎng)消化時間相對較長。吹打細胞時動作要輕巧，盡可能減少對細胞的損傷。

③傳代時細胞接種數(shù)量要多一些，使ATCC細胞能盡快適應新環(huán)境有利于細胞生存和增殖。隨消化分離而脫落的組織塊也可一并傳人新的培養(yǎng)瓶。