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更新時間:2019-09-24 09:04:19瀏覽次數(shù):285次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)DH5α 感受態(tài)細胞100ul*100-生命科學儀器
DH5α 感受態(tài)細胞100ul*20-生命科學儀器
JM109 感受態(tài)細胞 100ul*20-生命科學儀器
Mach1-T1 感受態(tài)細胞 100ul*100-生命科學儀器
Mach1-T1 感受態(tài)細胞 100ul*20-生命科學儀器
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產(chǎn)品名稱 | BL21(AI) 感受態(tài)細胞 100ul*10 |
包裝 | 100ul*10 |
分類 | 克隆感受態(tài)細胞 |
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
操作方法:
1. 從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物)并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。
BTA 小鼠膀胱腫瘤抗原 規(guī)格: 48T/96T
Cys-C 小鼠半*蛋白酶抑制劑/胱抑素C 規(guī)格: 48T/96T
LIFR 小鼠白血病抑制因子受體 規(guī)格: 48T/96T
ALCAM 小鼠白細胞活化黏附因子 規(guī)格: 48T/96T
CD30 小鼠白細胞分化抗原30 規(guī)格: 48T/96T
LTC4 小鼠白三烯C4 規(guī)格: 48T/96T
LTB4 小鼠白三烯B4 規(guī)格: 48T/96T
IL-7 小鼠白介素7 規(guī)格: 48T/96T
IL-4 小鼠白介素4 規(guī)格: 48T/96T
IL-3 小鼠白介素3 規(guī)格: 48T/96T
IL-2R 小鼠白介素2受體 規(guī)格: 48T/96T
IL-2sRβ 小鼠白介素2可溶性受體β鏈 規(guī)格: 48T/96T
IL-2sRα 小鼠白介素2可溶性受體α鏈 規(guī)格: 48T/96T
BL21(AI) 感受態(tài)細胞 100ul*10 IL-27 小鼠白介素27 規(guī)格: 48T/96T
IL-23 小鼠白介素23 規(guī)格: 48T/96T
IL-2 小鼠白介素2 規(guī)格: 48T/96T
IL1Ra 小鼠白介素1受體拮
shēng huà shì jì 硬脂酸鉀 容量: RT 100克
shēng huà shì jì 硬脂酸鈣 容量: 1克
shēng huà shì jì 硬脂酸鋇 容量: RT 100次/包
shēng huà shì jì 營養(yǎng)肉湯 容量: 2~8℃,避光 1克
shēng huà shì jì 營養(yǎng)瓊脂斜面 容量: 25克
shēng huà shì jì 營養(yǎng)瓊脂平板(無菌) 容量: 1米
shēng huà shì jì 營養(yǎng)瓊脂 容量: 500克
shēng huà shì jì 熒光素 容量: 100克
shēng huà shì jì 熒光胺 容量: 10克
shēng huà shì jì 茚三酮 容量: 1克
shēng huà shì jì 印度墨汁 容量: RT 10只/袋
shēng huà shì jì 隱色孔雀石綠 容量: 1克
shēng huà shì jì 隱色結(jié)晶紫 容量: 保存:-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 吲唑 容量: 2~8℃ 1克
shēng huà shì jì 吲哚試劑(Kovacs) 容量: RT 1米
shēng huà shì jì 吲哚培養(yǎng)基 容量: 100克
shēng huà shì jì * 容量: RT,避光 1克
shēng huà shì jì 吲哚 容量: RT 25克
shēng huà shì jì 銀絲 容量: 2~8℃ 1克
shēng huà shì jì 銀片 容量: 100克
抗劑 規(guī)格: 48T/96T
注意事項:
1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?;蜻B接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟:
1.取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2.待感受態(tài)細胞融化后,向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實際情況加入適量的DNA,通常100 μl感受態(tài)細胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘
4.每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
5.根據(jù)實驗需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細胞,加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時。
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