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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

shēng huà shì jì 轉鐵蛋白 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 豬血清（無菌） 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 豬血紅蛋白 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 豬膽鹽 容量： RT 100克

shēng huà shì jì 豬膽粉 容量： RT，避光 100克

shēng huà shì jì 重組蛋白A瓊脂糖凝膠FF 容量： 1克

shēng huà shì jì 重蒸酚 容量： 1克

shēng huà shì jì 重硫酸銨 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 重鉻酸鉀 容量： 5克

shēng huà shì jì 重鉻酸銨 容量： 100克

shēng huà shì jì 仲辛醇 容量： 5克

shēng huà shì jì 中性酯酶染液 容量： RT 80片/箱

shēng huà shì jì 中性氧化鋁 容量： 500克

shēng huà shì jì 中性樹膠 容量： 5克

shēng huà shì jì 中性紅 容量： 2～8℃ 50克

shēng huà shì jì * 容量： 1公斤

BL21 電擊感受態(tài)細胞 50ul*10shēng huà shì jì 中國藍乳糖瓊脂 容量： RT 25克

shēng huà shì jì 中國藍薔薇酸瓊脂 容量： 500克/包

shēng huà shì jì 中國蘭瓊脂平板 容量： 1米

shēng huà shì jì 質粒提取試劑盒 容量： 10片/箱

shēng huà shì jì *檢定培養(yǎng)基 容量： RT 支

shēng huà shì jì 指示選擇性培養(yǎng)基基礎 容量

 TIMP-3 小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子3 規(guī)格： 48T/96T

 TIMP-2 小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子2 規(guī)格： 48T/96T

 TIMP-1 小鼠基質金屬蛋白酶抑制因子1 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-9 小鼠基質金屬蛋白酶9/明膠酶B 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-8 小鼠基質金屬蛋白酶8/中性粒細胞膠原酶 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-7 小鼠基質金屬蛋白酶7 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-5 小鼠基質金屬蛋白酶5 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-4 小鼠基質金屬蛋白酶4 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-3 小鼠基質金屬蛋白酶3 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-2 小鼠基質金屬蛋白酶2/明膠酶A 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-13 小鼠基質金屬蛋白酶13 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-10 小鼠基質金屬蛋白酶10 規(guī)格： 48T/96T

 MMP-1 小鼠基質金屬蛋白酶1 規(guī)格： 48T/96T

 Myosin 小鼠肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 MYO/MB 小鼠肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 MYO/MB 小鼠肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 Tn-Ⅰ 小鼠肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T

 Activin-A 小鼠活化素A 規(guī)格： 48T/96T

： 保存：-20℃ 10克

注意事項:

1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質?；蜻B接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。