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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

人卵清蛋白特異性IgE 規(guī)格： 48T/96T

人卵巢癌標志物CA125ELISA Kit，48T/96T 人卵巢癌標志物CA125ELISA Kit，48T/96T 規(guī)格： 48T/96T

 PEA 人綠膿桿菌外毒素A 規(guī)格： 48T/96T

 TrxR 人硫氧還蛋白還原酶 規(guī)格： 48T/96T

 Trx 人硫氧化還原蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 MS 人硫酸褪黑色素 規(guī)格： 48T/96T

 KS 人硫酸角質素 規(guī)格： 48T/96T

 HSPG 人硫酸肝素糖蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 JE IgG 人流行性乙型腦炎抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T

 EP 人流行性腮腺炎 規(guī)格： 48T/96T

 FLU 人流感病毒抗體IgG 規(guī)格： 48T/96T

 FLU A 人流感病毒A 規(guī)格： 48T/96T

GV3101（pSoup） 感受態(tài)細胞 100ul*10 SCCAg 人鱗狀細胞癌相關抗原 規(guī)格： 48T/96T

 SCCAg-2 人鱗狀上皮細胞癌抗原2 規(guī)格： 48T/96T

 PIPLC 人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C 規(guī)格： 48T/96T

 PLCγ1 人磷酯酶Cγ鏈 規(guī)格： 48T/96T

 PLC 人磷酯酶C 規(guī)格： 48T/96T

 PI Ab-IgG/IgM 人磷脂酰肌醇抗體IgG/IgM 規(guī)格： 48T/96T

 GPC-3 人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 規(guī)格： 48T/96T

 PL-A2 人磷脂酶A2 規(guī)格： 48T/96T

 PCK 人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 規(guī)格： 48T/96T

 PGM 人磷酸葡萄糖變位酶 規(guī)格： 48T/96T

 PI3K 人磷酸肌醇3激酶 規(guī)格： 48T/96

shēng huà shì jì 硅粒 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 硅膠板HF254 容量： 保存-20℃ 25U

shēng huà shì jì 硅膠板H 容量： 2～8℃ 500毫克

shēng huà shì jì 硅膠板GF254 容量： 保存：-20℃ 10毫克

shēng huà shì jì 硅膠板GF 容量： 保存：-20℃ 10KU

shēng huà shì jì 硅膠板G 容量： 保存：-20℃ 150U

shēng huà shì jì 硅膠HF254 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 硅膠H 容量： 10KU

shēng huà shì jì 硅膠GF254 容量： 1克

shēng huà shì jì 硅膠G 容量： 保存：-20℃ 1克

shēng huà shì jì 硅膠60熒光薄層層析鋁箔板 容量： 25毫克

shēng huà shì jì 硅膠60熒光薄層層析玻璃板 容量： 保存-20℃ 5KU

shēng huà shì jì 硅膠60H 容量： 2～8℃ 25毫克

shēng huà shì jì 硅膠60G 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 硅膠60 薄層層析玻璃板 容量： 保存-20℃ 5KU

shēng huà shì jì 硅膠 容量： 5KU

shēng huà shì jì 硅(晶塊) 容量： 100克

shēng huà shì jì 光神霉素 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 寡霉素 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 寡聚脫氧胸苷纖維素 容量： 10克

shēng huà shì jì 固紫醬GBC鹽 容量： 250ku

shēng huà shì jì 固體改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基 容量： 40克

T

注意事項:

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產(chǎn)物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。