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培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

MLC 人肌球蛋白輕鏈 規(guī)格： 48T/96T

 Myosin 人肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 TN-R 人肌腱蛋白R 規(guī)格： 48T/96T

 TN-R 人肌腱蛋白R 規(guī)格： 48T/96T

 MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 Tn-Ⅰ 人肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T

 FⅫa 人活化*Ⅻ 規(guī)格： 48T/96T

 APCR 人活化蛋白C抵抗素 規(guī)格： 48T/96T

 APC 人活化蛋白C 規(guī)格： 48T/96T

 LHRH 人黃體生成素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T

 EHA105（pSoup） 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50cAMP 人* 規(guī)格： 48T/96T

 cGMP 人環(huán)磷酸鳥苷 規(guī)格： 48T/96T

 COX-2 人環(huán)加氧酶2 規(guī)格： 48T/96T

 CsA 人*A 規(guī)格： 48T/96T

MLC 人肌球蛋白輕鏈 規(guī)格： 48T/96T

 Myosin 人肌球蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 TN-R 人肌腱蛋白R 規(guī)格： 48T/96T

 TN-R 人肌腱蛋白R 規(guī)格： 48T/96T

 MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 MYO/MB 人肌紅蛋白 規(guī)格： 48T/96T

 Tn-Ⅰ 人肌鈣蛋白Ⅰ 規(guī)格： 48T/96T

 FⅫa 人活化*Ⅻ 規(guī)格： 48T/96T

 APCR 人活化蛋白C抵抗素 規(guī)格： 48T/96T

 APC 人活化蛋白C 規(guī)格： 48T/96T

 LHRH 人黃體生成素釋放激素 規(guī)格： 48T/96T

 cAMP 人* 規(guī)格： 48T/96T

 cGMP 人環(huán)磷酸鳥苷 規(guī)格： 48T/96T

 COX-2 人環(huán)加氧酶2 規(guī)格： 48T/96T

 CsA 人*A 規(guī)格： 48T

shēng huà shì jì 芐丙酮 容量： 5克

shēng huà shì jì * 容量： 100克

shēng huà shì jì 鉍酸鈉 容量： 10克

shēng huà shì jì 鉍粒 容量： 5克

shēng huà shì jì 鉍 容量： 25克

shēng huà shì jì 俾氏麥棕Y 容量： 保存：-20℃ 250毫克

shēng huà shì jì 吡咯烷二硫代甲酸銨鹽 容量： 1克

shēng huà shì jì 吡啶鹽酸鹽 容量： 25克

shēng huà shì jì 比布里希猩紅 容量： 50毫克

shēng huà shì jì 崩潰酶 容量： 1公斤

shēng huà shì jì * 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 苯乙酮 容量： 1克

shēng huà shì jì 醛 容量： RT，避光 100克

shēng huà shì jì 苯亞磺酸鈉 容量： 5毫克

shēng huà shì jì 苯芴酮 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 苯酞 容量： 500克

shēng huà shì jì 苯醚 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 苯肼 容量： RT 10克

shēng huà shì jì 苯甲氧羰酰琥珀酰亞胺 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 苯甲酰三氟丙酮 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 苯甲酰肼 容量： 25克

shēng huà shì jì 苯甲酰胺 容量： 2～8℃ 5克

/96T

注意事項:

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物時應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實驗需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。