購買客戶請先與我司細(xì)胞銷售人員核實(shí)訂購的產(chǎn)品名稱、種屬、貨號、數(shù)量、協(xié)商細(xì)胞價(jià)格并預(yù)約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細(xì)胞說明書并認(rèn)真閱讀以方便你的實(shí)驗(yàn)操作。產(chǎn)品僅用于科研

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時(shí)。

shēng huà shì jì

shēng huà shì jì 1-溴代辛烷 容量： 1克

shēng huà shì jì 1-溴代萘 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 1-溴代庚烷 容量： 2～8℃ 250毫克

shēng huà shì jì 1-辛醇 容量： 0.5毫升

shēng huà shì jì 1-十一碳烯 容量： 2～8℃ 200毫升

shēng huà shì jì 1-十四烯 容量： 100T

shēng huà shì jì 1-十八烯 容量： 避光，-20℃ 25T

shēng huà shì jì 1-壬醇 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 1-羥基苯并三氮唑一水物 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 1-羥基-2-萘甲酸 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 1-萘* 容量： 保存：-20℃ 0.25毫升

shēng huà shì jì 1-萘酚 容量： 100毫克

shēng huà shì jì 1-甲基咪唑 容量： 2～8℃ 1克

shēng huà shì jì 1-甲基-2-吡咯烷酮 容量： 保存：-20℃ 50毫克

shēng huà shì jì 1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮 容量： 2～8℃ 5U

shēng huà shì jì 1-苯基-3-甲基-4-苯甲酰基吡唑啉酮 容量： 1克

shēng huà shì jì 1-苯基-3

SK-MES-1(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SK-N-SH(人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SK-OV-3(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SMMC-7721(人肝癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SP2/0(小鼠骨髓瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SPC-A-1(人肺癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

ST(豬睪細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SY190 感受態(tài)細(xì)胞 100ul*50 TO(小鼠胚成纖維細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SVEC4-10(小鼠淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SV-HUC-1(人膀胱上皮永生化細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SW480(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SW579(人甲狀腺鱗癌細(xì)胞 ) 5×106cells/瓶×2

SW620(人結(jié)腸癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

SW626(人卵巢癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

T-24(人膀胱癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

T-47D(人細(xì)胞管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

T84(人結(jié)腸腺癌肺轉(zhuǎn)移細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

Tca-8113(人舌鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

TE-1(人食管癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

TF-1(人血液白血病細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

THP-1(人髓系白血病單核細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2

烷酮 容量： 50U

shēng huà shì jì 1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸鈉 容量： 25克

注意事項(xiàng):

1. 產(chǎn)品僅用于科研感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過長，長時(shí)間存放會降低轉(zhuǎn)化效率。
2. 混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?；蚋咝实倪B接產(chǎn)物可相應(yīng)減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。
2．待感受態(tài)細(xì)胞融化后，向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1         ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇
 5．根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。