購買客戶請先與我司細胞銷售人員核實訂購的產品名稱、種屬、貨號、數量、協商細胞價格并預約發(fā)貨期與提取方式。向銷售人員索取細胞說明書并認真閱讀以方便你的實驗操作。產品僅用于科研

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
操作方法：
1. 從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質?；蜻B接產物）并用手EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。
2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。
3. 向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復蘇60分鐘。
4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。如果進行藍白斑篩選操作，將平板放37℃培養(yǎng)至少15小時。

shēng huà shì jì 2-氨基-2-甲基-1,3-丙二醇 容量： 保存：-20℃ 20次/240ug/支

shēng huà shì jì 28-表高油菜素內酯 容量： 100克

shēng huà shì jì 25cm2正方斜口細胞培養(yǎng)瓶 容量： 100克

shēng huà shì jì 25cm2三角斜口細胞培養(yǎng)瓶 容量： 2～8℃ 25克

shēng huà shì jì 24孔細胞培養(yǎng)板 容量： 500U

shēng huà shì jì 24-表油菜素內酯 容量： 25克

shēng huà shì jì 2216E瓊脂 容量： 100克

shēng huà shì jì 20ul吸頭 容量： 2～8℃ 1KU

shēng huà shì jì 200ul吸頭 容量： 保存：-20℃ 25u

shēng huà shì jì 200ul無菌盒裝吸頭 容量： 保存：-20℃ 1KU

shēng huà shì jì 200ul盒裝吸頭 容量： 保存：-20℃ 100U

shēng huà shì jì 200ul盒裝無菌帶濾芯吸頭 容量： 25U

shēng huà shì jì 200ul袋裝無菌濾芯吸頭 容量： 保存：-20℃ 150ug

shēng huà shì jì 2′-溴脫氧尿苷 容量： 1克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸四鈉鹽 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸三鈉鹽 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胸苷-5′-二磷酸三鈉鹽 容量： 5克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胸苷-5′-單磷酸二鈉鹽 容量： RT 1克

shēng huà shì jì 2′-脫氧胸苷 容量： 25克

shēng huà shì jì 2′-脫氧腺苷-5′-三磷酸三鈉鹽 容量： RT 5克

shēng huà shì jì 2′-脫氧腺苷-5′-三磷酸二鈉鹽 容量： 1公斤

shēng huà shì jì 2′-脫氧腺苷-5′-二

lNVSc1 感受態(tài)細胞 100ul*50 TE-10(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2

TE-11(人食管癌細胞) 5×106cells/瓶×2

TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

TM4(正常小鼠丸Sertoli細胞) 5×106cells/瓶×2

TT(人甲狀腺導管癌細胞) 5×106cells/瓶×2

U-118 MG(人腦星形膠質母細胞瘤) 5×106cells/瓶×2

U14(小鼠子細胞) 5×106cells/瓶×2

U14-GFP(小鼠子細胞) 5×106cells/瓶×2

UACC-812(人細胞導管瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

UMR-106(大鼠骨肉瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

UM-UC-3(人膀胱移行細胞癌) 5×106cells/瓶×2

USMC(大鼠血管平滑肌細胞) 5×106cells/瓶×2

WERI-Rb-1(人視網膜神經膠質瘤細胞) 5×106cells/瓶×2

WI38/VA13(SV-40Z轉化肺成纖維細胞) 5×106cells/瓶×2

WPMY-1(人正常前列腺基質永生化細胞) 5×106cells/瓶×2

容量： RT 25克

注意事項:

1. 產品僅用于科研感受態(tài)細胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內加入目標DNA，不可在冰中放置時間過長，長時間存放會降低轉化效率。
2. 混入質粒或連接產物時應輕柔操作。
3. 轉化高濃度的質粒或高效率的連接產物可相應減少Z終用于涂板的菌量。
操作步驟：
1．取感受態(tài)細胞置于冰浴中。一次轉化感受態(tài)細胞的建議用量為50-100可以根據實際情況分裝使用。以下實驗以50μl感受態(tài)細胞為例。
2．待感受態(tài)細胞融化后，向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA（根據實際情況加入適量的DNA，通常100        μl感受態(tài)細胞能夠被1         ng超螺旋質粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻，冰浴30分鐘。
3．42℃熱擊45秒，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2-3分鐘
4．每個離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復蘇
 5．根據實驗需求，取適量已轉化的感受態(tài)細胞，加到含相應抗生素的或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開，將平板置于37℃直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16小時。