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更新時間:2017-06-06 18:49:40瀏覽次數(shù):114次
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公司專注于細胞培養(yǎng)及細胞銷售的細胞生物學技術研發(fā)的高科技企業(yè),主要擁有復蘇及凍存細胞及相關技術服務,公司主要為細胞生命科學研究人員提供有效的、雜交瘤細胞株;3H3F6技術培訓、售后服務,其細胞主要來源ATCC、Riken、ScienCell、Invitrogen、ECACC、ACC等細胞庫,以及部分國內(nèi)外細胞研究機構建系。
細胞名稱 雜交瘤細胞株;3H3F6
形態(tài)特性 淋巴母細胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權限 未定
雜交瘤細胞株;3H3F6處理方法
1、用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是經(jīng)過滅菌處理的)培養(yǎng)瓶外部。
2、肉眼觀察培養(yǎng)基,若出現(xiàn)渾濁情況,請及時。
3、將細胞置于顯微鏡下觀察,如有污染,請及時。
4、嚴格無菌操作,拆下封口膜,如果細胞的量較少,可放置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如果細胞量足夠,可進行離心收集細胞,用1×PBS洗兩遍,加入新鮮培養(yǎng)液后置于37℃,5%CO 2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞密度達到80%以上或存在成團現(xiàn)象,建議用0.25%*消化后傳代培養(yǎng)。
5、如果細胞為凍存狀態(tài),可將其繼續(xù)放入液氮中繼續(xù)保存。也可將其放入37℃的水浴中不時搖動,盡快解凍。解凍后,用75%酒精將凍存管擦拭干凈,用吸管吸出細胞懸液,放入培養(yǎng)瓶中,再加入相應的細胞培養(yǎng)液,放于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
細胞培養(yǎng)知識:
1.應如何避免細胞污染?
細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術不當、操作室 環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng) 基配制是減低污染之方法。
2.如果細胞發(fā)生微生物污染時,應如何處理?
直接滅菌后丟棄之。
3.購買之細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?
研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少, 大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性 損傷, 以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
4.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?
研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳, 常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用 錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于-80℃太久。
5.收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?
冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血 鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊?!技墑e〗:BR
來源:兩個大腸桿菌菌株,一個菌株含有T7噬菌體克隆基因5,另一個菌株含有大腸桿菌克隆基因trxA
濃度:10u/ul
活力定義:在37°C條件下,30分鐘內(nèi)能使10 nmol 的脫氧核糖核苷酸摻入多聚核苷酸片段(吸附在DE-81上)所需的酶量
酶活性分析混合物:40mM Tris-HCL(PH7.5), 1mM DTT, 10mM MgCL2, 0.1mg/ml BSA, 0.033mM各種dNTP,0.4MBq/ML(3H)-dTTP和0.5mM堿性變性的牛胸腺DNA
〖保存〗緩沖液組分:20mM 磷酸鉀(PH7.4), 0.1mM EDTA, 1mM DTT和50%(v/v)甘油
10×反應緩沖液:400mM Tris-HCL(PH7.5,25℃), 100mM MgCL2, 10mM DTT
抑制劑:金屬螯合劑,修飾試劑(無水酸和N-乙基順丁烯二酰亞胺可使3'→5' 外切核酸酶失活,但不影響聚合酶活性
失活:75℃加熱10分鐘
質(zhì)量控制:測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶污染
使用注意:37℃分析時需要短時間孵育
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:懸浮液,重組酶。T7 DNA聚合酶是一種模板依賴型DNA聚合酶,催化5'→3'方向的DNA合成。該DNA聚合酶具有高持續(xù)合成能力,可持續(xù)合成長片段DNA。該酶對單鏈和雙鏈DNA具有3'→5'外切核酸酶活性
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)除去殘留的基因組DNA,純化共價閉環(huán)的DNA分子;長片段引物延伸反應;DNA 3'-末端標記;定點突變位點的鏈延伸反應;DNA 5'-突出點位補平;第二鏈cDNA合成;原位檢測凋亡相關DN片段
〖保存〗:-20°C
T4 RNA連接酶
〖英文名稱〗:T4 RNA Ligase
分子量:43.6kDa,單體
〖級別〗:BR
來源:含有T4噬菌體克隆基因63的大腸桿菌
濃度:10u/ul
活性定義:是指在37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol 5'-[32P]-(A)12-18轉化為磷酸酶抗性形式所需的酶量
酶活性分析混合物:50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 10uM 5'-[32P]-(A)12-18(10uM 5'-末端)
〖保存〗液組分:20mM Tris-HCL(PH7.5), 50mM KC1, 1mM DTT,0.1mM EDTA,0.5mM ELUGENT變性劑和50%(v/v)甘油
雜交瘤細胞株;3H3F610×反應緩沖液:500mM HEPES-NaOH(PH8.0,25℃), 100mM MgCL2, 100mM DTT
抑制劑:金屬螯合劑、SH基團修飾試劑
失活:70℃加熱10分鐘
質(zhì)量控制:測試表明無內(nèi)切和外切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染
備注:反應體系中ATP的濃度取決于連接反應的類型,*的BSA反應濃度是0.1mg/ml
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:重組酶,催化ATP依賴的分子內(nèi)和分子間磷
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