當(dāng)前位置:上海莼試生物技術(shù)有限公司>>ATCC細(xì)胞>>動物細(xì)胞>> 雜交瘤細(xì)胞株;7H8
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所 在 地上海市
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更新時間:2017-06-06 18:48:49瀏覽次數(shù):72次
聯(lián)系我時,請告知來自 儀表網(wǎng)小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞;RAW 264.7 RAW264.7
公司專注于細(xì)胞培養(yǎng)及細(xì)胞銷售的細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)研發(fā)的高科技企業(yè),主要擁有復(fù)蘇及凍存細(xì)胞及相關(guān)技術(shù)服務(wù),公司主要為細(xì)胞生命科學(xué)研究人員提供有效的、雜交瘤細(xì)胞株;7H8技術(shù)培訓(xùn)、售后服務(wù),其細(xì)胞主要來源ATCC、Riken、ScienCell、Invitrogen、ECACC、ACC等細(xì)胞庫,以及部分國內(nèi)外細(xì)胞研究機(jī)構(gòu)建系。
細(xì)胞名稱 雜交瘤細(xì)胞株;7H8
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長特性 懸浮生長
特征特性 該細(xì)胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養(yǎng)條件 MEM-EBSS: Minimum Essential Medium (MEM Eagles with Earle's Balanced Salts) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
使用權(quán)限 未定
雜交瘤細(xì)胞株;7H8處理方法
1、用75%的酒精消毒(建議配制75%酒精的水是經(jīng)過滅菌處理的)培養(yǎng)瓶外部。
2、肉眼觀察培養(yǎng)基,若出現(xiàn)渾濁情況,請及時。
3、將細(xì)胞置于顯微鏡下觀察,如有污染,請及時。
4、嚴(yán)格無菌操作,拆下封口膜,如果細(xì)胞的量較少,可放置溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)。如果細(xì)胞量足夠,可進(jìn)行離心收集細(xì)胞,用1×PBS洗兩遍,加入新鮮培養(yǎng)液后置于37℃,5%CO 2的培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞密度達(dá)到80%以上或存在成團(tuán)現(xiàn)象,建議用0.25%*消化后傳代培養(yǎng)。
5、如果細(xì)胞為凍存狀態(tài),可將其繼續(xù)放入液氮中繼續(xù)保存。也可將其放入37℃的水浴中不時搖動,盡快解凍。解凍后,用75%酒精將凍存管擦拭干凈,用吸管吸出細(xì)胞懸液,放入培養(yǎng)瓶中,再加入相應(yīng)的細(xì)胞培養(yǎng)液,放于37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
細(xì)胞培養(yǎng)知識:
1.應(yīng)如何避免細(xì)胞污染?
細(xì)胞污染的種類可分成細(xì)菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因?yàn)闊o菌操作技術(shù)不當(dāng)、操作室 環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細(xì)胞等。嚴(yán)格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細(xì)胞來源和培養(yǎng) 基配制是減低污染之方法。
2.如果細(xì)胞發(fā)生微生物污染時,應(yīng)如何處理?
直接滅菌后丟棄之。
3.購買之細(xì)胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細(xì)胞數(shù)目太少之情形?
研究人員在冷凍細(xì)胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細(xì)胞數(shù)目太少, 大都是因?yàn)殡x心過程操作上的失誤,造成細(xì)胞的物理性 損傷, 以及細(xì)胞流失。建議細(xì)胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細(xì)胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可。
4.購買之細(xì)胞死亡或細(xì)胞存活率不佳可能原因?
研究人員在細(xì)胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳, 常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用 錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細(xì)胞解凍后,加以洗滌細(xì)胞和離心。懸浮細(xì)胞誤認(rèn)為死細(xì)胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細(xì)胞置于-80℃太久。
5.收到之冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?
冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因?yàn)椴僮髡邐A取冷凍管時用力不當(dāng),造成冷凍管裂損,建議使用止血 鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細(xì)胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。酸二酯鍵連接(5'-磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端),底物分子為多聚核苷酸、寡核苷酸、ssRNA和ssDNA,分子之間的小的連接底物是核苷3',5'-二磷酸,而分子內(nèi)連接的小底物是8個堿基的寡核苷酸。配套提供反應(yīng)緩沖液、ATP和BSA溶液。催化3'→5'磷酸二酯鍵的形成,使核苷酸的5'-磷酸末端和5'-羥基末端連接。作用底物包括單鏈RNA、DNA及二核苷焦磷酸。隨酶提供10X 反應(yīng)緩沖液
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)連接RNA和RNA ;RNA3'-末端標(biāo)記胞嘧啶3',5'-雙[a-32P]磷酸; tRNA的特異性修飾;合成寡核苷酸的環(huán)化;寡聚脫氧核糖核苷酸與單鏈cDNA連接,用于5'RACE(快速擴(kuò)增cDNA末端)分析
〖保存〗: -20°C
T4 DNA連接酶
〖英文名稱〗:T4 DNA Ligase
〖號〗:9015-85-4
分子量:55.3kDa,單體
〖級別〗:BR
來源:含有T4噬菌體克隆基因30的大腸桿菌
活性定義:是指在ATP-PPi交換反應(yīng)中,37℃、30分鐘內(nèi)將1nmol [32PPi]轉(zhuǎn)換為Norit可吸收形式所需的酶量(weiss單位,1個weiss單位相當(dāng)于約200個粘性末端連接單位。1個粘性末端連接單位:20ul反應(yīng)體系(50mM Tris-HCL(PH7.5), 10mM DTT, 10mM MgCL2, 1mM ATP, 25ug/ml BSA, 12uM(300ug/ml)的5-DNA末端)中,在16℃、30分鐘內(nèi)連接50%連接HindIII酶切的Lambda DNA 產(chǎn)物所需的酶量)
抑制劑:當(dāng)反應(yīng)體系中NaC1或KC1的濃度超過200 mM時,可強(qiáng)烈抑制T4 DNA Ligase活性
失活:65℃加熱10分鐘或70℃加熱5分鐘
注意:T4 DNA Ligase與DNA結(jié)合會改變條帶的瓊脂糖凝膠電泳遷移率,為避免此現(xiàn)象,電泳前需處理樣本或分子量標(biāo)準(zhǔn)。樣本處理如下:樣本與Fermentas公司6×DNA Loading Dye&SDS溶液(#R1151)混合,75℃加熱5分鐘或65℃加熱10分鐘后冰浴〖保存〗;轉(zhuǎn)化時,連接產(chǎn)物的體積不得超過感受態(tài)細(xì)胞體積中的10%;電轉(zhuǎn)化之前,先用方抽提方法除去連接混合物中的T4 DNA Ligase,然后經(jīng)乙醇沉淀純化抽提產(chǎn)物
雜交瘤細(xì)胞株;7H8質(zhì)量控制:測試表明無內(nèi)切脫氧核糖核酸酶、核糖核酸酶、磷酸酶污染。功能檢測:粘性末端或平末端DNA的連接能力
〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗:液體。該酶催化雙鏈DNA或RNA中毗鄰的5'磷酸基團(tuán)和3'-羥基末端之間形成磷酸二酯鍵,還可以修復(fù)雙鏈DNA、RNA或DNA/RNA復(fù)合體中的單鏈切口,連接DNA的粘性和平末端,但該酶對單鏈核酸無酶活性。該酶需要輔因子ATP
〖用途〗:本品僅供科研,不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)粘性末端或平末端雙鏈DNA的連接;雙鏈寡核苷酸接頭與雙鏈DNA連接;雙鏈DNA、RNA或DNA-RNA復(fù)合體中缺口的修復(fù);連接酶介導(dǎo)的RNA檢測;位點(diǎn)特異性突變
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