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人源細(xì)胞成脂誘導(dǎo)分化的原理及步驟

時(shí)間:2017-10-27閱讀:1505
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人源細(xì)胞Oil Red O(油紅O)染色的方法和原理:Oil Red O(油紅O)又名為1-[2,5-二甲基-4-(2,5-二甲基苯偶氮)苯偶氮]-2 萘酚,蘇丹紅5B,溶劑紅27。紅色粉末。是一種油溶性偶氮染料。易溶于苯,溶于乙醇(呈淺黃色紅色)和丙酮。生物染色劑,淀粉凝膠電泳中作類脂和脂肪染色。顯微技術(shù)中用作脂肪染色劑。作為脂肪細(xì)胞的染色劑的原理是使用Oil Red O 的油溶性,對(duì)其它的細(xì)胞結(jié)構(gòu)著色性差。

成脂肪誘導(dǎo)的過(guò)程中,細(xì)胞在胞漿中不斷有油滴的累積,并不斷的增加變大,zui后整個(gè)細(xì)胞的胞漿中都是油滴。Oil Red O染色的方法是對(duì)油滴的染色的一種方法。

步驟:
(1)吸去誘導(dǎo)液,再PBS 洗一到兩次;
(2)加入10%中性甲醛,固定60min;
(3)吸去固定液,加入現(xiàn)配和過(guò)濾后的Oil Red O 染色液,染色60min;
(4)用PBS 洗2-5 次,去處殘留的染色液和殘?jiān)?br />(5)人源細(xì)胞加入PBS,完成染色。
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