【概要】

　　赭曲霉毒素A (Ochratoxin A)是曲霉屬和青霉屬的真菌形成的次級代謝產(chǎn)物，屬烈性的shen臟毒和gan臟毒，廣泛存在于各種食物中，谷物及其副產(chǎn)品是赭曲霉毒素A的主要來源。動物實(shí)驗(yàn)表明攝入了被這種毒素污染的飼料后，會發(fā)生急性或慢性中毒癥。防止污染赭曲霉毒素A的食品和飼料直接或間接地進(jìn)入人類食物鏈，加強(qiáng)對赭曲霉毒素A的檢測十分重要。

　　【適用范圍及性能】

　　用于定性、定量檢測谷物、酒類、中藥等食品和飼料等樣本中的赭曲霉毒素A時(shí)的樣品前處理。

　　柱容量：≥200ng

　　回收率：≥90%

　　【試驗(yàn)原理】

　　本產(chǎn)品的測定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)，赭曲霉毒素A單克隆抗體連接在柱內(nèi)凝膠上，樣品中的赭曲霉毒素A經(jīng)過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢的通過赭曲霉毒素A免疫親和層析柱，在免疫親和柱內(nèi)，赭曲霉毒素A與抗體結(jié)合，之后洗滌免疫親和柱除去沒有被結(jié)合的其他物質(zhì)。用甲醇洗脫赭曲霉毒素A，然后注入到分析儀器中用于檢測。

　　【包裝組成】

　　根據(jù)不同規(guī)格，每一個(gè)盒中包含5/25支赭曲霉毒素A免疫親和層析柱及1份說明書。

　　【需要而未提供的設(shè)備及試劑】

　　設(shè)備：

　　1. 高速均質(zhì)器或組織勻漿機(jī)

　　2. 粉碎機(jī)

　　3. 200mL/50mL量筒

　　4. 天平：感量0.1g

　　5. 微量移液器：單道 100mL～1000mL

　　6. 槽紋濾紙(折疊快速定性或定量濾紙)

　　7. 玻璃微纖維濾紙(1.5mm孔徑)

　　8. 50mL漏斗

　　9. 一次性玻璃試管

　　10. 泵流操作架(包括空氣泵，不同容積的玻璃注射器等)

　　試劑：

　　1. 甲醇(色譜級)

　　2. 乙酸(分析純，色譜級)

　　3. 蒸餾水或去離子水

　　4. pH7.0磷酸鹽緩沖溶液(PBS緩沖液)：稱取8.0g氯hua鈉，1.2g*，0.2g磷酸二氫鉀，0.2g氯hua鉀，用990mL純水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，后用純水稀釋至1000mL

　　5. 樣品提取液：配制甲醇-水(8：2)溶液作為樣品提取液

　　洗脫液：配制甲醇-乙酸(99：1)溶液作為洗脫液

　　【試劑配制】

　　樣品提取液：配制甲醇-水(8：2)溶液作為樣品提取液

　　洗脫液：配制甲醇-乙酸(99：1)溶液作為洗脫液

　　【樣本處理步驟】

　　(一)花生，玉米，大米，小麥及其制品和飼料(稀釋倍數(shù)2.5)

　　1. 稱取20g粉碎的樣品于100mL容量瓶中，加入5.0g氯hua鈉，以甲醇-水(8：2)溶液定容至100mL;

　　2. 轉(zhuǎn)移到均質(zhì)杯中，以均質(zhì)器高速攪拌，提取2min;

　　3. 4000r/min離心5min或用定量濾紙過濾;

　　4. 取10mL濾液并加入40mLPBS緩沖液稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測;

　　5. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

　　6. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體;

　　7. 以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液;

　　8. 再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體;

　　9. 準(zhǔn)確加入1.0mL洗脫液洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

　　(二)啤酒，黃酒等酒類(稀釋倍數(shù)1)

　　1. 取10mL試樣脫氣后與90mLPBS緩沖液混勻，用玻璃微纖維濾紙過濾，取過濾后液體待測;

　　2. 將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃注射器;

　　3. 將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約1滴/S流速緩慢通過免疫親和柱，直至2mL~3mL空氣通過柱體;

　　4. 以10.0mL清洗緩沖液淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液;

　　5. 再以10.0mL水淋洗柱子1次，流速為1-2滴/S，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體;

　　6. 準(zhǔn)確加入1.0mL洗脫液洗脫，流速為1 滴/S，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

　　【結(jié)果判定】

　　經(jīng)免疫親和柱凈化后，收集到的甲醇洗脫液可直接使用熒光計(jì)或者HPLC檢測，也可使用薄層色譜或者酶聯(lián)免疫試劑盒進(jìn)行檢測。

　　【注意事項(xiàng)】

　　1. 赭曲霉毒素危害*，應(yīng)戴手套操作;

　　2. 不要使用過了有效日期的免疫親和柱。

　　3. 洗脫液可以直接使用色譜級甲醇洗脫，但會降低回收率。

　　【貯藏條件及保存期】

　　貯藏條件：親和柱可于常溫保存，2-8℃儲存可延長有效期，不可凍存;

　　保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。