組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）

2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋?zhuān)ㄗⅲ翰灰苯釉诎逯羞M(jìn)行倍比稀釋?zhuān)?，分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。

3、 樣品稀釋液：1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
服務(wù)流程：

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；

②堿基配對(duì)原則；

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性，使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行，結(jié)合的特異性大大增加，被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū)，其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位)；在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶，一次性地將反應(yīng)液加好后，即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng)，一般在2～4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析，不一定要用同位素，無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞，DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板?？芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

反應(yīng)五要素：

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：

①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

雞免疫球蛋白G Fc段低親和力受體IIIa(FcγR3A) Alexa Fluor 488標(biāo)記的羊抗人IgM

雞尿游離皮質(zhì)(UFC) Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgM

雞非受體酪氨酸激酶2(TNK2) Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgM

雞結(jié)蛋白(Des) PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgM

雞前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9(PCSK9) PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgM

雞羧肽酶E(CPE)Cy3標(biāo)記的羊抗人IgM

雞黑素瘤黏附分子(MCAM)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgM

雞骨保護(hù)素配體(OPGL)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗人IgM

雞X型膠原(COL10)辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞胃蛋白酶原A(PGA)堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞神經(jīng)絲蛋白(NF)羅丹明標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞凝血因子Ⅸ(F9)FITC標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞孕激素相關(guān)內(nèi)膜蛋白(PAEP) 膠體金標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞分泌粒蛋白II (SCG2)PE-Cy5.5標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞前膠原C端肽酶(PCP) PE-Cy7標(biāo)記的小鼠抗人IgG

雞殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)  Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgG
登革病毒2型檢測(cè)試劑盒（熒光PCR法）V5 tag/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記V5 tag標(biāo)簽抗體IgGFmoc-4-氨-L-氨酸 98%

V.cholera Ogawa/FITC  熒光素標(biāo)記01群小川型霍亂弧菌抗體IgGN-(9-芴氧羰酰)-D-3-氯氨酸 98%

VCP/p97 /FITC  熒光素標(biāo)記抗含纈酪肽蛋白抗體IgGN-芴氧羰-L-4-氯氨酸 98%

V.cholera Ogawa/Biotin  生物素化01群稻葉型霍亂弧菌抗體IgGFMOC-D-4-氯氨酸 98%

V.cholera Ogawa/Biotin  生物素化01群小川型霍亂弧菌抗體IgGL-4-氟氨酸鹽酸鹽 97%

Influenza A Virus H1/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗季節(jié)性A型流感病H1抗體IgG4-氟-D-氨酸鹽酸鹽 99%

Influenza A Virus H3/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記羊抗季節(jié)性流感病H3抗體IgGFMOC-L-4-氟氨酸 98%

H1N1-A/HRP(Influenza A virus)California  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記兔抗季節(jié)性A型人流感病H1N1抗體IgG(美國(guó)加州型)Z-4-Fluoro-Phe-OH 98%