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規(guī)格 | 50次 | 貨號 | YS-P013535 |
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品牌 | YSRIBIO |
服務(wù)流程:
公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒 | 50次 | YS-P013535 |
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細(xì)胞中檢出一個靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
豬上皮膜抗原(EMA) 辛-β-D-硫代吡喃葡萄糖苷磷酸化GATA結(jié)合蛋白3抗體
豬結(jié)蛋白(Des) D-綿子糖五水;蜜三糖五水延伸因子G2抗體
豬乳酸脫氫酶C(LDHC) D-山梨葡糖淀粉酶抗體
豬非受體酪氨酸激酶2(TNK2) n-辛-β-D-吡喃葡萄糖苷(OGP)谷氨酰6-磷酸果糖轉(zhuǎn)移酶抗體
豬黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)L-核糖谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ抗體
豬表皮脂肪酸結(jié)合蛋白5(FABP5)L-核糖(標(biāo)準(zhǔn)品)谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ2抗體
豬胃內(nèi)因子(GIF)2-脫氧-L-核糖γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶6抗體
豬脫氫表雄酮硫酸酯(DHEA-S) 4-傘形酮-β-D-木糖苷顆粒酶A抗體
豬乳酸脫氫酶B(LDHB) 2-脫氧-D-核糖顆粒酶D/B/E/N/G/F/H抗體
豬D-乳酸脫氫酶(D-LDH) D-半乳糖(標(biāo)準(zhǔn)品)粒-巨噬集落激因子3受體抗體
豬芳硫酸酯酶B(ASB) D-半乳糖血型糖蛋白A/涎糖蛋白抗體
豬組織多肽抗原(TPA)鹽酸肼;雙鹽酸肼G蛋白修補結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體
豬免疫球蛋白A Fc段受體(FcαR/CD89) 羥磷灰石G蛋白偶聯(lián)受體GPR63蛋白抗體
豬胸腺肽β4(TMSβ4)羥纖維素(粘度11250-21000mPas)磷酸化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體
豬前列腺素E合酶2(PTGES2)羥纖維素G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體
豬去腎上腺素(NA/NE) 羥纖維素(30000 mpa.s)G蛋白偶聯(lián)受體15抗體
牛呼腸孤病毒染料法熒光定量RT-PCR 試劑盒Phospho-Ret (Tyr1062) 磷酸化指狀蛋白RET抗體單組份無吡啶卡爾費休滴定劑 5m/ml,測水量較高樣品
Resistin (rat, mouse) 抵抗素抗體(大鼠,小鼠)單組份無吡啶卡爾費休滴定劑 2mml,測含水量較低樣品
Resistin (human, dog) 抵抗素抗體(人,犬)異 >99.0%(GC)
RELMa 抵抗素樣分子α抗體異 >93.0%(GC)
RelB 核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體異 CP,98.0%
Phospho-RelB (Ser552) 磷酸化核轉(zhuǎn)錄因子NFKB-RelB蛋白抗體二異 98%
Reprimo 質(zhì)內(nèi)的糖化蛋白抗體三異 95%
C-REL 淋巴衍生C-型凝集素抗體(±)-樟腦(合成) 96%
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會。
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