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上海研生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第10年

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當(dāng)前位置:上海研生實(shí)業(yè)有限公司>>PCR類>>熒光定量PCR試劑盒>> 50次流感病毒H15亞型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

流感病毒H15亞型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

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產(chǎn)品型號(hào)50次

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時(shí)間:2021-11-20 19:11:48瀏覽次數(shù):112次

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規(guī)格 50次 貨號(hào) YS-P013736
品牌 YSRIBIO
流感病毒H15亞型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)原理是由一對(duì)引物介導(dǎo),能在動(dòng)植物體外對(duì)特定基因(DNA)片斷進(jìn)行快速酶促擴(kuò)增,經(jīng)過(guò)n個(gè)熱循環(huán)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物中所含特定基因數(shù)是原始模板數(shù)的(1+E)n(0<E<1,擴(kuò)增效率=倍,使得檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物中的特定基因成為可能。

服務(wù)流程:

公司產(chǎn)品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

流感病毒H15亞型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)

50T

YS-P013736

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟

溫度

時(shí)間

循環(huán)數(shù)

預(yù)變性

94℃

5   min

1

變性

94℃

10   sec

30-40

退火

50-65℃

20   sec

30-40

延伸

72℃

30   sec/kb

30-40

終延伸

72℃

5   min

1

組成及試劑配制:

1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)

2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。

3、 樣品稀釋液:1×20ml。

4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。

5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
QQ截圖20191211135002.jpg

PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:

①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;

②堿基配對(duì)原則;

③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;

④靶基因的特異性與保守性。

其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。

(2) 靈敏度高

PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中zui小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。

(3) 簡(jiǎn)便、快速

PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。

(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低

不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。

猴生長(zhǎng)分化因子11(GDF11)鹽酸氟桂利(標(biāo)準(zhǔn)品)類固受體激活蛋白3抗體

猴纖溶酶(Fbn) 鹽酸氟桂利軸突導(dǎo)向因子1抗體

猴生長(zhǎng)調(diào)節(jié)致癌因γ(GROγ)  異喹啉物(標(biāo)準(zhǔn)品)酪氨酸激酶B抗體

猴多聚免疫球蛋白受體(PIGR/SC)羥酯(對(duì)羥酸酯)(標(biāo)準(zhǔn)品)跨膜受體蛋白Notch-3抗體

α葡萄糖苷酶(α-Glu) P-氨酸異酯(標(biāo)準(zhǔn)品)中性粒彈性蛋白酶ELANE抗體

β-骨膠原交聯(lián)(β-CTx)對(duì)氯酰(標(biāo)準(zhǔn)品)型肝炎病NS4B(65kDa)抗體

猴胚胎性硫糖蛋白抗原(FSA)  鹽酸非索非那定(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)生長(zhǎng)因子受體相關(guān)蛋白1抗體

猴胰腺癌標(biāo)志物(CA242)鹽酸非索非那定死亡結(jié)構(gòu)域蛋白NRH2抗體

猴蛋白激酶C-β1(PKCβ1)尼扎替丁(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)絲蛋白抗體

猴雌二受體(ER) 醋谷/酰谷酰(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化核因子抗體

猴性別決定區(qū)Y框蛋白3(SOX3)蒙脫石(標(biāo)準(zhǔn)品)跨膜受體蛋白Notch-1抗體

MAX二聚化蛋白1(mxd1)佛手柑素;香檸檬素;佛手柑亭;香檸檬亭(標(biāo)準(zhǔn)品)磷酸化核受體Rev-Erbα抗體

猴信號(hào)傳導(dǎo)轉(zhuǎn)錄激活因子2(STAT2)奧美沙坦酯(標(biāo)準(zhǔn)品)雞新城疫病抗體

猴通用轉(zhuǎn)錄復(fù)合體(GTC) 鹽酸羅卡因(標(biāo)準(zhǔn)品)還原型輔酶Ⅱ/磷酸酰腺嘌呤二核苷酸抗體

猴胰島素樣生長(zhǎng)因子酸不穩(wěn)定亞(IGFALS) 2,6-二(標(biāo)準(zhǔn)品)NIT2蛋白抗體

猴趨化因子樣因子(CKLF)番石榴苷(標(biāo)準(zhǔn)品)神經(jīng)分化因子1抗體
流感病毒H15亞型檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)EGF/FITC  熒光素標(biāo)記表皮生長(zhǎng)因子抗體(大鼠)IgG二硫化碳 低級(jí),low benzene, ≥99.9%

EP3/FITC  熒光素標(biāo)記前列腺素E受體3抗體IgG環(huán)戊烷 for HPLC,農(nóng)殘級(jí),≥75% (GC)

E.coli O6 (Escherichia coli O6)/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗大腸埃希桿菌O6抗體IgG環(huán)己烷 ACS光譜級(jí), ≥99.5% (GC)

E.coli DH-5 Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體IgG三氯 for HPLC, ≥99.8%(劇品)

E.coli DH-5 Alpha /HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體IgG1,2-二氯烷  for HPLC, ≥99.9%

E.coli O139/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗志賀素大腸桿菌O139抗體IgG酸酯 農(nóng)殘級(jí)

E.coli O157/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗大腸埃希氏菌O157抗體IgG氟羅里硅土 農(nóng)殘級(jí)

EPEC/E.coli /HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗腸致病性大腸桿菌抗體IgG正庚烷 農(nóng)殘級(jí), ≥99%(GC)
反應(yīng)五要素:

參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+

引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則:

①引物長(zhǎng)度: 15-30bp,常用為20bp左右。

②引物擴(kuò)增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。

③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴(kuò)增效果不佳,G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC最好隨機(jī)分布,避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補(bǔ),特別是3'端的互補(bǔ),否則會(huì)形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。

⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)第二個(gè)堿基,應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì),以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。

⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn), 被擴(kuò)增的靶序列最好有適宜的酶切位點(diǎn), 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。

⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。

引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增,且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。


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